2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、食品安全突發(fā)事件頻率高是近年來食品安全問題的一個顯著特點,沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學上具有重要意義的人畜共患病之一,其病原沙門氏菌屬腸道細菌科,包括那些引起食物中毒,導致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細菌。人畜感染后可呈無癥狀帶菌狀態(tài),也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾病,它可能加重病態(tài)或死亡率,或者降低動物的繁殖生產(chǎn)力。為確保食品安全與食品貿易,需要大力加強食品檢驗的力度,迫切需要建立快速、靈敏的沙門氏菌的檢驗方法。
   本研究以沙門氏菌的i

2、nvA基因為靶基因,選擇特異性引物,進行PCR擴增,檢測肉中沙門氏菌。對PCR反應體系中鎂離子濃度、引物添加量及退火溫度和循環(huán)數(shù)進行優(yōu)化,以確定適宜的PCR反應體系和擴增程序,其適宜反應體系為:6μL 10×PCR buffer,4 μL dNTPs混合物,5.0μL Mg2+(25mM),2 μL 10 μmol正向引物,2 μL 10 μmol反向引物,0.25 μL(5 U/μL)Taq,20.75 μL水,總反應體系為50μL;

3、其適宜的PCR擴增程序為:PCR反應采用冷啟動,94℃預變性5 min;變性94℃ 1 min~退火58℃ 0.5 min進行35個循環(huán)。PCR反應產(chǎn)物在2%的瓊脂糖凝膠中進行電泳,凝膠成像系統(tǒng)觀察結果。對擴增產(chǎn)物進行了測序,PCR擴增產(chǎn)物序列與文獻報道的靶基因序列的同源性達100%,從而證實PCR擴增產(chǎn)物確為目的擴增產(chǎn)物。本研究共檢測了16株菌,以驗證引物的特異性,結果表明:4株沙門氏菌均為陽性結果;12株其它非沙門氏菌菌株均為陰性結

4、果。因此該引物特異性強,可用于檢測沙門氏菌。
   利用FTA濾膜,采用PCR技術可直接檢測肉及肉制品中的沙門氏菌,無需增菌,靈敏度高。在采用浮選與溶劑萃取相結合方法的基礎上,使用FTA膜可高效地從鮮肉中提取沙門氏菌的DNA,消除PCR反應的抑制因子。以沙門氏菌編碼吸附和侵襲上皮細胞表面蛋白的invA基因為靶基因,經(jīng)過PCR擴增得到376bp的產(chǎn)物。經(jīng)過DNA測序證實該產(chǎn)物為目的擴增產(chǎn)物。使用FTA濾膜處理樣品,再通過PCR方法

5、檢測沙門氏菌,豬肉、牛肉、羊肉、雞肉勻漿液的檢出限均為101cfu/mL,可在6h內完成對肉中沙門氏菌的檢測,比目前普遍采用的先增菌再進行PCR檢測的方法縮短了12~24h。實際檢測了72份樣品,同時與GB/T4789.4-2003方法做比較,PCR方法的檢出率為27.8%,檢出時間為6h,GB/T4789.4-2003方法檢出率為22.2%,檢出時間為5d,結果表明FTA濾膜用于PCR檢測肉中沙門氏菌檢出率高,耗時短。使用FTA濾膜法

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