歐美楊108號遺傳轉化條件篩選及抗蟲性測定.pdf

1、楊樹種類多、生長快、適應性強，在我國分布廣泛并大面積種植，在林業(yè)生產和生態(tài)恢復中發(fā)揮著巨大的經濟效益和生態(tài)功能。由于人工林面積的逐年增加和經營管理不當，長期遭受病蟲的侵害，造成嚴重的經濟和生態(tài)損失。本文以歐美楊108號(Populusnigra×Populus deltoids“108”)為受體材料，采用農桿菌介導法，在優(yōu)化的轉化條件下將外源抗蟲基因（Bt+蜘蛛殺蟲肽基因）成功導入該受體中，并對轉化植株進行分子和生物測定，確定歐美楊10

2、8號轉化植株的表達效果、抗性水平，為抗蟲楊樹的定向培育和野外應用奠定科學基礎。
　　1.對歐美楊108號遺傳轉化條件優(yōu)化后，確定最佳轉化體系為選擇歐美楊108號無菌苗葉基部置于不含卡那霉素、含200μmol/L AS的分化培養(yǎng)基中，預培養(yǎng)48h后用濃度OD600=0.1的菌液侵染10min，移入不含卡那霉素、含200μmol/L AS的分化培養(yǎng)基中，28℃共培養(yǎng)24h～48h后，取出置于溫室中除菌篩選培養(yǎng)，最終獲得抗性植株。

3、>　　2.以上述最佳轉化條件為基礎，進行了遺傳轉化，獲得卡那霉素抗性芽5株。經過PCR檢測4株呈陽性，初步表明其目的基因已轉化到歐美楊108號基因組中。經過PCR-Southern印跡雜交檢測，4株均呈陽性，陽性率100％，進一步證明，目的基因已整合到歐美楊108號基因組內。
　　3.利用轉化植株對舞毒蛾幼蟲進行了生物測定，結果表明，2個轉化植株均具有延緩幼蟲發(fā)育和降低發(fā)育速率的作用，而且轉化植株TP1對幼蟲發(fā)育速率的影響明顯大于