山楊轉(zhuǎn)雙價(jià)抗蟲基因的研究.pdf

1、本文以山楊(Populus davidiana Dodetumefaciens)為受體材料，采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法進(jìn)行外源雙價(jià)抗蟲基因（Bt+蜘蛛殺蟲肽）的遺傳轉(zhuǎn)化研究，探討了影響山楊遺傳轉(zhuǎn)化的若干因子，初步建立了山楊遺傳轉(zhuǎn)化體系;獲得了轉(zhuǎn)化再生的植株，經(jīng)PCR檢測(cè)和Southern雜交檢測(cè)，證明了目的基因已經(jīng)整合到山楊的基因組中，為山楊的遺傳轉(zhuǎn)化及抗蟲育種提供了理論基礎(chǔ)和研究材料。
　　本試驗(yàn)的研究結(jié)果如下：
　　

2、1、優(yōu)化了山楊組培再生體系，結(jié)果表明，山楊不同組織的適宜培養(yǎng)基分別為:分化培養(yǎng)基:MS+BA0.5 mg/L+NAA0.01 mg/L;生根培養(yǎng)基:WPM+IBA0.4 mg/L。
　　2、篩選了山楊轉(zhuǎn)化體及選擇生根培養(yǎng)的卡那霉素和頭孢噻肟鈉濃度?？敲顾匾种迫~片分化的濃度下限為20 mg/L，芽誘導(dǎo)生根的卡那霉素臨界濃度為20 mg/L;700mg/L的頭孢噻肟鈉能有效的除菌，且對(duì)葉片分化及生根培養(yǎng)沒有不利影響。
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3、探討了影響山楊遺傳轉(zhuǎn)化的主要因子，初步確立了山楊遺傳轉(zhuǎn)化體系。將帶切口的健壯葉片預(yù)培養(yǎng)2d后，用無菌蒸餾水稀釋成OD600=0.3～0.4、培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的農(nóng)桿菌(OD600=0.5)侵染葉片10～15 min;共培養(yǎng)2d后，轉(zhuǎn)入到篩選培養(yǎng)基（附加700mg/L頭孢噻肟鈉+20 mg/L卡那霉素的MS培養(yǎng)基）中進(jìn)行誘導(dǎo)抗性不定芽生長(zhǎng)，當(dāng)抗性不定芽長(zhǎng)到1.5～2 cm時(shí)轉(zhuǎn)入選擇生根培養(yǎng)基（附加800 mg/L頭孢噻肟鈉+20 mg/L卡