核苷酸切除修復(fù)基因XPC、XPD單核苷酸多態(tài)性與食管癌、賁門癌的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的：DNA修復(fù)基因?qū)τ诰S持基因組完整性，修復(fù)致癌因素所致的DNA損傷有重要作用，被認(rèn)為是與腫瘤遺傳易感性相關(guān)的候選基因。核苷酸切除修復(fù)為DNA修復(fù)途徑之一，且核苷酸切除修復(fù)基因具有高度多態(tài)性。本研究旨在探討核苷酸切除修復(fù)基因XPC第8外顯子C/T、第15外顯子A/C和第9內(nèi)含子PAT-/+單核苷酸多態(tài)性 (single nucleotide polymorphi-sm，SNP)以及XPD基因第10外顯子G/A、第23Pb顯子A/C單核

2、苷酸多態(tài)性與河北省食管癌、賁門癌高發(fā)區(qū)-磁縣、涉縣人群食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)和賁門腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma，GCA)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。 方法：采用基于人群的病例-對照研究方法，采集580例腫瘤患者(327例ESCC，253例GCA)和61名健康對照個(gè)體的靜脈抗凝血5ml，同時(shí)記錄其病史、個(gè)人相關(guān)資料及上消化道腫瘤家族

3、史。以蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性 (polymerase chain reaction-restriction fragmem lengthpolymorphism，PCR-RFLP)方法和引物介導(dǎo)的限制性聚合酶鏈反應(yīng) (primer-introduced restriction analysis PCR，PIRA-PCR) 方法檢測XPC、XPD的多態(tài)性基因型。

4、 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5版軟件包(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行，P<..05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對照組基因型頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg 平衡分析。病例組與對照組的基因型、等位基因頻率分布比較采用行×列表卡方檢驗(yàn)。單體型頻率及連鎖不平衡分析采用EH軟件和2LD軟件 (1.2 version，Rockefeller University，New York)。以非條件Logist

5、ic回歸法計(jì)算經(jīng)性別、年齡、吸煙狀況、上消化道腫瘤(upper gastrointestinal cancers，UGIC)家族史校正的相對風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)。 結(jié)果:1 ESCC和GCA患者組中UGIC家族史陽性個(gè)體的比例(分別為48.0％和47.8％)顯著高于健康對照組(34.2％)(x<'2>=17.22和14.19，P=0.00)

6、。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理顯示UGIC家族史可增加ESCC、GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、吸煙狀況校正后的OR值分別為1.80(95％CI=1.36～2.38)和1.75(95％CI=1.29～2.36)。 2 健康對照組中的XPC基因三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡 (P>0.05)。XPC基因第8外顯子C/T SNP基因型和等位基因頻率分布在ESCC患者組和健康對照組之間無顯著性差異 (P>0.05)。X

7、PC基因第8外顯子C/T SNP的T等位基因頻率在GCA患者組為26.5％，顯著低于健康對照組的32.5％(x<'2>=6.12，P=0.01)。與C/C基因型相比，攜帶C/T基因型可顯著降低GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、吸煙狀況、UGIC家族史校正后的OR值為0.62(95％CI=0.45～0.84)。根據(jù)個(gè)體吸煙狀況進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與C/C基因型相比，攜帶C/T基因型可顯著降低吸煙個(gè)體GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、UGIC家族

8、史校正后的 OR 值為0.57(95％CI=0.36～0.91)。根據(jù)UGIC家族史進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與C/C基因型相比，攜帶C/T基因型可顯著降低UGIC家族史陰性個(gè)體ESCC、GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、吸煙狀況校正后的OR值分別為0.67(9.5％CI=0.46～0.99)和0.57(95％CI=0.37～0.88)。 3 XPC基因第15外顯子A/C SNP基因型和等位基因頻率分布在ESCC、GCA患者組和健康對照組

9、之間均無顯著性差異(P>0.05)。根據(jù)個(gè)體吸煙狀況進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與A/A基因型相比，攜帶C/C基因型可增加非吸煙個(gè)體ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、UGIC家族史校正后的OR值為2.05(95％CI=1.15～3.66)。根據(jù)UGIC家族史進(jìn)行的分層分析未發(fā)現(xiàn)XPC基因第15外顯子A/C SNP與ESCC和GCA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。 4 XPC基因第9內(nèi)含子PAT-/+SNP基因型和等位基因頻率分布在ESCC、GCA患者組

10、和健康對照組之間均無顯著性差異 (P>0.05)。根據(jù)個(gè)體吸煙狀況進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與PAT-/-基因型相比，攜帶PAT+/+基因型可增加非吸煙個(gè)體ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、UGIC家族史校正后的OR值為1.79(95％CI=1.00～3.18)。根據(jù)UGIC家族史分層分析未發(fā)現(xiàn)XPC基因第9內(nèi)含子PAT-/+SNP與ESCC和GCA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。 5 應(yīng)用2LD軟件對XPC基因的三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)分別進(jìn)行兩兩聯(lián)合分析顯

11、示，XPC基因第8外顯子的C等位基因與第15外顯子的A等位基因呈連鎖不平衡狀態(tài)；第8外顯子的C等位基因與第9內(nèi)含子的PAT-等位基因呈連鎖不平衡狀態(tài)；第9內(nèi)含子的PAT-等位基因與第15外顯子的A等位基因呈連鎖不平衡狀態(tài)。應(yīng)用EH軟件對XPC基因三個(gè)SNP位點(diǎn)聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn)，C/A/-單體型是人群中最常見的，占28.4％。C/A/+、C/C/+單體型明顯降低ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，OR 值分別為0.71和0.54(95％CI=0.52～0.9

12、7和0.36～0.83)，單體型分布在GCA組和健康對照組之間無顯著性差異(P>0.05)。 6 健康對照組中的XPD基因兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。XPD基因第10外顯子G/A SNP基因型和等位基因頻率分布在ESCC、GCA患者組和健康對照組之間均無顯著性差異(P>0.05)。根據(jù)個(gè)體吸煙狀況以及UGIC家族史分層分析均未發(fā)現(xiàn)XPD基因第10外顯子G/A SNP與ESCC

13、和GCA 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。 7 XPD基因第23外顯子 A/C SNP 基因型和等位基因頻率分布在ESCC、GCA患者組和健康對照組之間均無顯著性差異 (P>0.05)。根據(jù)個(gè)體吸煙狀況進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與A/A基因型相比，攜帶C等位基因(A/C或C/C基因型)可降低非吸煙個(gè)體GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、UGIC家族史校正后的 OR 值為0.50(95％CI=0.26～0.97)。根據(jù)UGIC家族史分層分析未發(fā)現(xiàn)XPD基因

14、第23外顯子A/C SNP與ESCC和GCA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。 8 應(yīng)用EH和2LD軟件對XPD基因第10外顯子G/A和第23外顯子A/C SNP位點(diǎn)進(jìn)行的聯(lián)合分析顯示，XPD基因第10外顯子的G等位基因與第23外顯子的A等位基因呈連鎖不平衡狀態(tài)。G/A 單體型是人群中最常見的，占85.9％。單體型分布在ESCC、GCA患者組與健康對照組之間均無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論:1 上消化道腫瘤家族史明顯增加ESCC、

15、GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 2 XPC基因第8外顯子C/T SNP可能與GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，即攜帶C/T基因型可顯著降低GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，這種作用主要表現(xiàn)在吸煙個(gè)體及UGIC家族史陰性個(gè)體。XPC基因第8外顯子C/T SNP可能與UGIC家族史陰性個(gè)體ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，即攜帶C/T基因型可顯著降低UGIC家族史陰性個(gè)體ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 3 XPC基因第15外顯子A/C SNP可能與非吸煙個(gè)體 ESCC

16、的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，即攜帶C/C基因型可顯著增加非吸煙個(gè)體ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 4 XPC 基因第9內(nèi)含子PAT-/+SNP可能與非吸煙個(gè)體ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，即攜帶PAT+/+基因型可顯著增加非吸煙個(gè)體ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 5 XPC基因第8外顯子的C等位基因與第15外顯子的A等位基因呈連鎖不平衡狀態(tài)；第8外顯子的C等位基因與第9內(nèi)含子的PAT-等位基因呈連鎖不平衡狀態(tài)；第9內(nèi)含子的PAT-等位基因與第15外顯子的A等

17、位基因呈連鎖不平衡狀態(tài)。XPC基因三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)聯(lián)合分析，C/A/+、C/C/+單體型可顯著降低ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 6 XPD 基因第10外顯子G/A SNP可能與ESCC、GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。 7 XPD基因第23外顯子A/C SNP可能與非吸煙個(gè)體GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，即攜帶C等位基因(A/C或C/C基因型)可顯著降低非吸煙個(gè)體GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 8 XPD基因第10外顯子的G等位基因與第23外顯子的A等