eIF4E在膽管癌侵襲和轉(zhuǎn)移調(diào)控機(jī)制中的作用研究.pdf

1、膽管癌的病例數(shù)呈逐年明顯上升的趨勢(shì)，而影響其治療和病人遠(yuǎn)期生存率的主要因素是腫瘤的轉(zhuǎn)移。國(guó)內(nèi)外研究表明，腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中腫瘤細(xì)胞粘附、運(yùn)動(dòng)能力的改變，與細(xì)胞外基質(zhì)間的相互作用以及腫瘤血管形成是腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。尋找影響轉(zhuǎn)移各個(gè)步驟及各有關(guān)表型的調(diào)控點(diǎn)或觸發(fā)點(diǎn)，是探明腫瘤轉(zhuǎn)移調(diào)控機(jī)制的關(guān)鍵。大量研究表明，蛋白質(zhì)合成主要受轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的調(diào)節(jié)?，F(xiàn)有的相關(guān)資料表明：真核生物的蛋白合成有著相同的合成體系，在這一體系中存在著僅在某些病理情

2、況下才有表達(dá)量差異的調(diào)節(jié)因子。我們推測(cè)，這些異常表達(dá)的蛋白質(zhì)的合成可能在翻譯水平上存在有共同的調(diào)控因素，在腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生中可能起著“分子開(kāi)關(guān)”式的作用。 在真核生物蛋白質(zhì)合成體系中，真核生物蛋白合成始動(dòng)因子4E(EukaryoticProteinSynthesisInitiationFactor4E，eIF4E)在蛋白合成起始階段起著重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，正常情況下，eIF4E水平相對(duì)較低，而在多種惡性腫瘤(頭頸部鱗

3、癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等)中存在有eIF4E的過(guò)度表達(dá)，而且eIF4E的過(guò)度表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。由此推測(cè)，eIF4E可能發(fā)揮腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)鍵環(huán)節(jié)的共同調(diào)節(jié)因子作用。因此深入研究eIF4E在腫瘤轉(zhuǎn)移調(diào)控機(jī)制中的作用，有可能使腫瘤轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究獲得進(jìn)展。 本課題正是基于對(duì)在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中蛋白質(zhì)合成有著相同調(diào)控因素，和eIF4E在蛋白質(zhì)合成中的“分子開(kāi)關(guān)”式作用的設(shè)想，以臨床膽管癌組織標(biāo)本和膽管癌細(xì)胞系QBC939為

4、研究對(duì)象，研究eIF4E在膽管癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮的作用，從翻譯水平上研究腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制和調(diào)控機(jī)理。 主要研究?jī)?nèi)容與方法：1.膽管癌組織eIF4E的表達(dá)及與臨床惡性表型間關(guān)系。應(yīng)用免疫組化技術(shù)觀察eIF4E在臨床膽管癌組織標(biāo)本中的表達(dá)水平，并分析其表達(dá)水平與腫瘤的分化程度及腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的相互關(guān)系。 2.膽管癌組織eIF4E的表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白重要代表物(CD44、MMP-9、VEGF)的關(guān)系。我們選擇CD44

5、，MMP-9和VEGF作為指標(biāo)，應(yīng)用免疫組化技術(shù)研究膽管癌組織eIF4E的表達(dá)與上述腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)蛋白的關(guān)系。 3.比較體外培養(yǎng)的膽管癌QBC939細(xì)胞不同轉(zhuǎn)移性亞群間eIF4E表達(dá)的差異。膽管癌細(xì)胞株QBC939高、低轉(zhuǎn)移性亞群通過(guò)Transwell濾膜/人工細(xì)胞外基質(zhì)侵襲篩選模型進(jìn)行篩選。膽管癌細(xì)胞eIF4E蛋白表達(dá)以WesternBlot方法進(jìn)行檢測(cè)。 4.下調(diào)eIF4E的表達(dá)對(duì)膽管癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。運(yùn)用

6、反義寡核苷酸技術(shù)，下調(diào)QBC939細(xì)胞eIF4E的表達(dá)，觀察膽管癌細(xì)胞三類(lèi)與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)蛋白的重要代表物CD44，MMP-9和VEGF的表達(dá)水平變化。膽管癌細(xì)胞CD44，MMP-9和VEGF蛋白表達(dá)以WesternBlot方法進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果與討論膽管癌組織中eIF4E的表達(dá)均上調(diào)，且與性別、年齡及腫瘤部位無(wú)顯著差異；而與腫瘤的分化程度差異有顯著性；與腫瘤有無(wú)浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移及手術(shù)方式差異非常顯著。此研究結(jié)果表明，eIF4E的過(guò)度

7、表達(dá)可能與膽管癌的發(fā)展相關(guān)，其過(guò)度表達(dá)或許可以作為膽管癌惡性程度的一個(gè)分子標(biāo)志。 膽管癌組織中CD44，MMP-9和VEGF的表達(dá)均與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)，此結(jié)果與其它腫瘤的相關(guān)研究一致，表明CD44，MMP-9和VEGF是膽管癌轉(zhuǎn)移的重要相關(guān)分子。膽管癌組織中eIF4E和CD44、eIF4E和MMP-9及eIF4E和VEGF間的表達(dá)均具有正相關(guān)性，提示eIF4E在介導(dǎo)膽管癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。 高轉(zhuǎn)移性膽管癌QBC93

8、9細(xì)胞亞群eIF4E的表達(dá)較之低轉(zhuǎn)移性膽管癌QBC939細(xì)胞亞群有顯著增強(qiáng)，并顯示出比低轉(zhuǎn)移性亞群更高的遷移和侵襲能力，結(jié)果提示eIF4E的表達(dá)是體外膽管癌細(xì)胞維持高轉(zhuǎn)移表型的重要因素。 反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染后膽管癌細(xì)胞的eIF4E表達(dá)明顯減少，正義組無(wú)明顯變化。下調(diào)eIF4E的表達(dá)后，膽管癌細(xì)胞的CD44、MMP-9、VEGF蛋白合成有明顯下降，正義組較之空白對(duì)照組差別不明顯。以上結(jié)果表明，eIF4E在翻譯中的關(guān)鍵性作用，使它可能

9、通過(guò)以下環(huán)節(jié)發(fā)揮腫瘤轉(zhuǎn)移的共同調(diào)節(jié)因子作用：①eIF4E高表達(dá)促進(jìn)CD44的表達(dá)，可相應(yīng)增強(qiáng)膽管癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附能力，膽管癌細(xì)胞粘附能力的提高促使了癌細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的粘附，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的發(fā)生；②eIF4E作為蛋白質(zhì)合成的起始階段的“分子開(kāi)關(guān)”，其高表達(dá)可以通過(guò)細(xì)胞內(nèi)某些重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增強(qiáng)MMP-9的表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移：③eIF4E在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平促進(jìn)VEGF的表達(dá)，通過(guò)V