TFDP3對前列腺癌LNCaP細(xì)胞自噬及凋亡調(diào)控的初步研究.pdf

1、前列腺癌（prostate cancer，PCa)是男性腫瘤中僅次于肺癌的惡性腫瘤之一。但是由于前列腺癌大多發(fā)生隱匿，一旦確診，很大一部分患者基本已經(jīng)到了中晚期，預(yù)后較差。目前治療前列腺癌的一般方式是去雄激素治療，旨在激素治療后誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。但是這種治療措施在初期雖然有效，一段時(shí)間后幾乎所有患者都會(huì)由雄激素依賴轉(zhuǎn)變?yōu)榉切奂に匾蕾囆?，最終導(dǎo)致腫瘤的進(jìn)展或轉(zhuǎn)移。雄激素依賴到非依賴的轉(zhuǎn)變機(jī)制在各領(lǐng)域研究備受關(guān)注，目前已知的機(jī)制包括雄激素

2、受體（AR）突變、克隆選擇、共激活因子（Coactivator）的表達(dá)等，目的都是各種方式避免前列腺癌細(xì)胞的凋亡。研究表明，自噬是降解細(xì)胞器的主要途徑，一定條件下，在細(xì)胞凋亡中自噬可能會(huì)起到保護(hù)作用，抑制細(xì)胞自噬會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。另一方面，細(xì)胞的凋亡途徑受到抑制后也可能導(dǎo)致細(xì)胞的自噬性死亡。目前，在前列腺中雄激素非依賴的形成是否和自噬有一定的調(diào)控關(guān)系，或者在前列腺中自噬和凋亡如何被調(diào)控，并沒有明確的結(jié)論。
　　TFDP3是新發(fā)現(xiàn)的

3、E2F1的直接調(diào)控因子。有研究表明TFDP3不僅可以抑制E2F1誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，而且還可以抑制E2F1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；但是在前列腺癌中是否參與了凋亡和自噬作用有待研究及進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　本研究通過免疫組化和原位雜交探索TFDP3在前列腺癌組織中的表達(dá)；通過半定量 RT-PCR檢測TFDP3在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)。然后，分別通過RT-PCR和Western blot初步探索TFDP3在E2F1作用后自噬相關(guān)蛋白LC3B基因水平和蛋白

4、水平的變化，并且利用流式細(xì)胞儀檢測TFDP3與E2F1的相互作用對前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　主要研究內(nèi)容包括：
　　1.通過NCBI基因組數(shù)據(jù)庫檢索到TFDP3基因的DNA序列，利用軟件Primer5.0設(shè)計(jì)引物。以前列腺癌LNCaP細(xì)胞基因組DNA作為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增TFDP3片段，長約1244bp。RT-PCR，原位雜交雜交和免疫組化結(jié)果表明，TFDP3在前列腺癌細(xì)胞和組織中均有不同程度的表達(dá)。
　　2

5、.通過轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-TFDP3和PCMV-E2F1-HA于LNCaP細(xì)胞后，RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果均顯示，TFDP3高表達(dá)的LNCaP細(xì)胞中自噬相關(guān)基因LC3B表達(dá)水平明顯升高；而轉(zhuǎn)染PCMV-E2F1-HA后LNCaP細(xì)胞中LC3B水平明顯降低(P<0.05)。表明轉(zhuǎn)錄因子TFDP3過表達(dá)可以誘導(dǎo)LNCaP細(xì)胞的自噬現(xiàn)象，同時(shí)提示E2F1和TFDP3的相互作用可以抑制LNCaP細(xì)胞的自噬功能。
　

6、　3.通過流式細(xì)胞儀檢測TFDP3與E2F1相互作用后前列腺癌細(xì)胞凋亡的變化，可以發(fā)現(xiàn)：PCMV-E2F1-HA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡率明顯上升（P<0.05)，而與pcDNA3.1-TFDP3共轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡率明顯下降（P<0.05）。證實(shí)TFDP3可以抑制E2F1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　以上研究我們可以得到如下結(jié)論，TFDP3可以誘導(dǎo) LNCaP細(xì)胞中自噬基因LC3B的表達(dá)，同時(shí)抑制E2F1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，提示TFDP3誘導(dǎo)的自