補(bǔ)腎通絡(luò)解毒方對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠的防治作用的研究.pdf

1、　　目的：觀察比較不同劑量的中藥用量對 EAE 的發(fā)病情況、病理改變、外周血 T淋巴細(xì)胞 CD4、CD8的表達(dá)及對 CD4/CD8比值的影響,探討補(bǔ)腎解毒通絡(luò)中藥對 EAE 有無防治作用及可能的免疫學(xué)機(jī)制,為中藥臨床上治療多發(fā)性硬化提供實驗依據(jù)。
　　方法：(1)取健康雌性 Wistar 大鼠 112 只,隨機(jī)分為五組,空白組、空白對照組、模型組、激素組、中藥治療組,中藥治療組又按劑量不同分為低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量

2、治療組,每組 16只。空白組不做任何處理；空白對照組造模前 7 天開始給與中劑量中藥灌胃；模型組造模后開始每天給與生理鹽水 0.2ml灌胃；激素組造模后 7d開始每天按每公斤體重 6.9mg藥量給予 0.2ml醋酸潑尼松灌胃；中藥組造模前 7d開始給藥,高劑量組每天按每公斤體重 60g 生藥量給予中藥 2ml 灌胃,中劑量組每天按每公斤體重 30g 生藥量給予 1ml 灌胃,低劑量組每天按每公斤體重 15生藥量給予 0.5ml灌胃,以上

3、灌胃方法均灌胃至造模后第14 天。( 2)實驗動物造模方法：采用豚鼠全脊髓勻漿和完全福式佐劑( CFA)制成的混合液作為抗原,同時皮內(nèi)注射百日咳疫苗,對除空白組、空白對照組外的其余各組大鼠進(jìn)行抗原免疫制作 EAE大鼠模型。( 3)動物模型鑒定：大鼠出現(xiàn)活動減少、食欲不振、體重減輕、肢體無力和癱瘓等癥狀,視為造模成功。( 4)造模后每日觀察各組實驗動物的體重變化及神經(jīng)動能評分；分別于造模后第 15、21天于大鼠眶靜脈叢處采取靜脈血,用流式

4、細(xì)胞儀檢測 T 淋巴細(xì)胞 CD4+、CD8+百分?jǐn)?shù)及 CD4+/CD8+比值變化；并于造模后第 15、21 天分別心腔灌注處死大鼠, HE 染色觀察腦脊髓組織病理變化。( 5)采用 SPSS13.0 軟件包行統(tǒng)計學(xué)處理,各組數(shù)據(jù)以x±s表示,采用單因素方差分析方法,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：( 1)各組 EAE大鼠發(fā)病的一般情況：空白組和中藥空白組大鼠無發(fā)病。與模型組、中藥高、低劑量組大鼠比較,中藥中劑量組

5、大鼠的發(fā)病率、潛伏期天數(shù)、神經(jīng)功能評分、體重?fù)p失程度降低,有顯著性差異( P<0.05)；與激素組相比較無顯著性差異( P>0.05)。( 2)各組大鼠 CNS的 HE染色病理結(jié)果：正常對照組大鼠腦和脊髓無異常。造模成功后模型組大鼠高峰期可見腦及脊髓實質(zhì)內(nèi)小血管充血,血管周圍有大量炎細(xì)胞浸潤,形成“袖套”狀改變。治療組病理改變有不同程度的減輕,中藥中劑量組減輕最明顯。( 3)流式細(xì)胞術(shù)觀察造模后第 15、21 天 T淋巴細(xì)胞 CD4+、

6、CD8+百分?jǐn)?shù)及 CD4+/CD8+比值變化：與模型組相比,治療后各組 EAE 大鼠在兩個不同時期 CD4+T 淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)降低, CD8+T 淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)升高, CD4+/CD8+比值降低(P<0.05) ,且中藥中劑量組較模型組、中藥高、低劑量組變化明顯(P<0.05) ,與激素組之間無顯著性差異。
　　結(jié)論：( 1)補(bǔ)腎通絡(luò)解毒方對 EAE有一定的治療作用,有效改善 EAE的臨床表現(xiàn),降低發(fā)病率,抑制體重下降,減輕發(fā)