血管內(nèi)皮生長因子C對大鼠近端腎小管上皮細胞凋亡的保護作用.pdf

1、目的
　　研究腫瘤壞死因子α(TNF-α)對腎小管上皮細胞生成血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)的影響,以及TNF-α對腎小管上皮細胞凋亡的影響,并探討VEGF-C對TNF-α誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞凋亡的作用。
　　方法
　　體內(nèi)試驗將大鼠分為假手術(shù)組和UUO模型組,用Westernblot和免疫組化的方法檢測VEGF-C在腎組織內(nèi)的表達水平和定位情況;體外實驗培養(yǎng)大鼠近端腎小管上皮細胞(NRK52E),對照組按照常規(guī)方

2、式培養(yǎng),實驗組用TNF-α刺激刺激,并分做時間梯度和濃度梯度,分別在NRK52E細胞中加入不同濃度的TNF-α作用不同時間,用實時定量PCR和Westernblot方法檢測各組細胞VEGF-C的mRNA和蛋白的表達。用不同濃度TNF-α與一定濃度放線菌素D(ActD)刺激細胞24h,流式細胞學(xué)方法檢測細胞凋亡。再用不同濃度的VEGF-C與適當(dāng)濃度的TNF-α和ActD共同孵育細胞,觀察VEGF-C對TNF-α所致細胞凋亡的抑制情況。

3、r>　　結(jié)果
　　VEGF-C在假手術(shù)組及UUO模型組大鼠腎組織中均有表達,位置主要在腎小管管壁。UUO模型組較假手術(shù)組VEGF-C表達增多。正常NRK52E細胞表達VEGF-C。TNF-α誘導(dǎo)NRK52E細胞VEGF-C的mRNA及蛋白表達增加,呈劑量和時間依賴性。TNF-α(加入ActD30ng/ml)促進細胞凋亡,凋亡率隨TNF-α濃度增高而增加。VEGF-C能夠抑制凋亡,50ng/ml時對細胞凋亡有抑制作用,100ng/m