大黃酸抑制高糖和血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞肥大.pdf

1、目的:探討大黃酸(Rhein)對(duì)高糖和血管緊張素Ⅱ(angiotensin，Ang Ⅱ)誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞肥大的影響及其影響途徑。 方法:實(shí)驗(yàn)用SD大鼠。麻醉下，無菌分離單根近球小管并培養(yǎng)，以免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定體外培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞。MTT比色法檢測(cè)體外培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞的增殖情況。在高糖(30mM)環(huán)境下用血管緊張素Ⅱ(10<'-7>M)刺激腎小管上皮細(xì)胞肥大。與此同時(shí)，加入不同濃度的大黃酸(30mg/L，15

2、mg/L，5mg/L)，作用24～72小時(shí)后檢測(cè)細(xì)胞體積，<'3>H-亮氨酸摻入量以及蛋白質(zhì)含量以觀察細(xì)胞肥大的變化。 結(jié)果:MTT比色法檢測(cè)體外培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞的增殖情況，各實(shí)驗(yàn)組OD<,490>值分別與正常對(duì)照組比較，在含D-葡萄糖30mmol/L組，細(xì)胞培養(yǎng)24h與正常對(duì)照組比較出現(xiàn)細(xì)胞增殖受抑制(0.318±0.037 VS 0.340±0.035，P<0.05)，48h抑制程度增強(qiáng)(0.304±0.030 YS 0

3、.335±0.036，P<0.01)，72h顯著抑制(0.241±0.015 vs 0.317±0.027，P<0.01)。體外培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)高糖(30mM)培養(yǎng)72小時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞體積明顯增大，表現(xiàn)為流式細(xì)胞儀檢測(cè)前向角散射光的強(qiáng)度明顯右移(122.84±2.93 VS 116.80±2.94，P<0.01)，<'3>H-亮氨酸摻入量(16905±1271.3 cpm/10<'5>cells VS7308.5±961.1cpm/1

4、0<'5>cells，P<0.01)及細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量(5.13±0.20μg/10<'5>cells VS 3.39±0.19μg/10<'5>cells，P<0.01)明顯增加。細(xì)胞經(jīng)高糖(30mM)+Ang Ⅱ(10<'-7>M)培養(yǎng)72小時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞體積(127.59±2.36VS 122.84±2.93，P<0.05)，<'3>H-亮氨酸摻入量(23362±2182.5 cpm/10<'5>cellsVS 16905±1271.

5、3cpm/10<'5>cells,P<0.01)及細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量(7.06±0.24μg/10<'5>cells vS 5.13±0.20μg/10<'5>cells，P<0.01)較高糖(30mM)組增加。加入大黃酸處理72小時(shí)后，大黃酸(30mg/L)組較高糖(30mM)+Ang Ⅱ (10<'-7>M)培養(yǎng)組細(xì)胞體積減小(118.85±3.67 VS125.87±2.95, P<0.05)， <'3>H-亮氨酸摻入量明顯降低(1

6、0947±1007.3cpm/10<'5>cells VS 21849±2809.7cpm/10<'5>cells,P<0.01)，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量明顯降低(4.38±0．45μg/10<'5>cells vs 7.16±0.20μg/10<'5>cells，P<0.01)。 結(jié)論:①高糖培養(yǎng)抑制腎小管上皮細(xì)胞增殖。 ②高糖培養(yǎng)誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞肥大。 ③血管緊張素Ⅱ增強(qiáng)高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞肥大作用。