高糖對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞差異蛋白組學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)高糖作用下大鼠腎小管上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)動(dòng)態(tài)變化的觀察，了解高糖環(huán)境對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)成分的影響，從而希望找到糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。
　　方法:
　　1.將腎小管上皮細(xì)胞分別置于含正常糖濃度組（含糖5.5mM）、高糖組（含糖30mM）的培養(yǎng)基中進(jìn)行體外培養(yǎng)，分別在8小時(shí)、72小時(shí)、25天后分別提取細(xì)胞總蛋白。'
　　2.將分離的總蛋白運(yùn)用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行分離。
　　3.分離

2、后的凝膠應(yīng)用Image Master2D Platinum6.0軟件對(duì)其2-DE圖像進(jìn)行分析，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)價(jià)雙向凝膠電泳結(jié)果的重復(fù)性和可靠性，運(yùn)用方差不對(duì)齊的t檢驗(yàn)獲得P值，P<0.05并且該點(diǎn)的volume％值變化超出2倍作為標(biāo)準(zhǔn)，找出差異蛋白點(diǎn)。
　　4.通過(guò)質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF, MALDI-TOF-TOF, LC-MS-MS）對(duì)找出的差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定，然后對(duì)鑒定出的差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　5.

3、利用MASCOT數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，其差異蛋白點(diǎn)的判定標(biāo)準(zhǔn)是以得分大于60，并且覆蓋序列大于15%，測(cè)量與預(yù)測(cè)分子量之間相差小于30%，測(cè)得的等電點(diǎn)與預(yù)測(cè)等電點(diǎn)相差小于2.0。最后再利用PUBMED查詢差異蛋白的功能。
　　結(jié)果:
　　1.雙向電泳凝膠平均獲得了蛋白點(diǎn)956.33±21.37個(gè)，832個(gè)點(diǎn)在所有膠上均出現(xiàn)，匹配率為87%。
　　2.運(yùn)用雙向電泳技術(shù)分析高糖及正常培養(yǎng)基的腎小管上皮細(xì)胞的蛋白組學(xué)，發(fā)現(xiàn)8個(gè)差異

4、蛋白點(diǎn)經(jīng)過(guò)矯正后（P<0.05）通過(guò)質(zhì)譜鑒定，它們分別是：膜突蛋白（moesin），膜聯(lián)蛋白A4（annexin A4），電壓依賴性陰離子通道蛋白2（voltage-dependent anion-selective channel protein2 VDAC2），磷酸變位酶1（phosphoglycerate mutase1），細(xì)胞核酸結(jié)合蛋白2（cellular nucleic acid-binding protein isofor

5、m2），基質(zhì)細(xì)胞衍生因子2-類蛋白1前體（stromal cell-derived factor2-like protein1 precursor，SDF2L1），加帽蛋白，凝溶膠蛋白樣，異構(gòu)型CRA_b（capping protein, gelsolin-like, isoform CRA_b），核苷二磷酸激酶A（nucleoside diphosphate kinase A）。
　　結(jié)論:
　　通過(guò)對(duì)蛋白組學(xué)的研究，找出