越桔酒渣花色素及其生物學(xué)活性研究.pdf

1、越桔(Vaccinium uliginosum L.)酒渣是果實(shí)釀酒初級利用后的工業(yè)廢棄物,花色素是其中所含的生物活性成分之一。為探尋越桔酒渣綜合利用的技術(shù)途徑,實(shí)現(xiàn)資源深度開發(fā),本文就越桔酒渣花色素的提取精制工藝、主要化學(xué)成分類型、抗氧化、抑制腫瘤及調(diào)節(jié)血壓等方面展開研究。
　　 采用單因素比較和正交試驗(yàn)法,首先探討花色素提取和精制的技術(shù)條件,越桔酒渣花色素提取的最佳條件為:室溫條件,80％pH3.0乙醇作浸提劑,料液比1:4

2、0,提取2.5h；用HPD100大孔樹脂對色素進(jìn)行精制,樹脂柱徑高比1:10,花色素濃度0.5g/L,流速1mL/min為最佳吸附條件,色素吸附量可達(dá)到0.0987g/mL濕樹脂；60％pH3.0乙醇作洗脫液,流速1mL/min,4.5倍柱體積的洗脫液條件下解析效果最佳,色素回收率達(dá)到95.48％;制取的花色素呈紫紅色,色價(jià)為91.5,得率為3.00％。
　　 研究制取花色素理化性質(zhì)表明,越桔酒渣花色素(Pigment from

3、 WildVaccinium uliginosum L.Wine Pomace,簡稱PVP)屬花色苷類,為水溶性色素。采用高效液相法對PVP進(jìn)行分析,初步確定PVP中含有槲皮素、楊梅素及異鼠李素等黃酮類化合物。
　　 體外抗氧化活性試驗(yàn)表明,PVP表現(xiàn)出很強(qiáng)的清除DPPH·和·O2-活性,IC50分別為10.69μg/mL和224.01μg/mL。同時(shí),一定濃度的PVP可以抑制黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,簡稱

4、XO)的活性。10μg/mL的PVP能夠抑制600μMH2O2對牛主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(bovine aortic endothelial cells,簡稱BAECs)的過氧損傷,清除細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive Oxygen Species,簡稱ROS),改善內(nèi)皮功能障礙。
　　 采用MTT法觀察PVP體外對人鼻咽癌(CNE)、腎癌(786-0)及結(jié)腸癌(HCT-8)細(xì)胞增殖的抑制作用,結(jié)果顯示:PVP抑制人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)增

5、殖的IC50為80.30 mg/L；對腎癌細(xì)胞(786-0)具有一定的抑制作用,300 mg/L為抑制細(xì)胞增殖的最高臨界點(diǎn),抑制率為68.43％:對人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-8)增殖抑制的IC50為250.29mg/L。據(jù)報(bào)道腸道具有酶解花色苷成花色素的作用,腸道對花色素苷的吸收具有重要意義,因此對人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-8)展開進(jìn)一步的研究。研究采用Wright染色法、吖啶橙染色法觀察PVP作用HCT-8后的細(xì)胞形態(tài),結(jié)果發(fā)現(xiàn)HCT-8經(jīng)P

6、VP作用后,出現(xiàn)凋亡特征,細(xì)胞變小皺縮,核凝固,細(xì)胞膜破裂等；流式細(xì)胞儀觀察PVP對細(xì)胞周期的影響,表明PVP下調(diào)G0/G1期細(xì)胞比例,減少HCT-8細(xì)胞有絲分裂和細(xì)胞分化,從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　 采用自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats,簡稱SHR)為模型,每日定時(shí)灌胃一次PVP,連續(xù)4周,結(jié)果發(fā)現(xiàn),高劑量PVP(150mg/kg·dbw)SHR大鼠飲水量顯著增高,體重增長緩慢,血

7、壓顯著降低,血清甘油三酯(TG)含量顯著減少,但PVP對血清葡萄糖(Glu),總膽固醇(TC),高密度脂蛋白總膽固醇(HDL-C)和總抗氧化能力(T-AOC)無顯著影響,提示PVP除具一定的降壓作用外還具有調(diào)節(jié)血脂的潛在作用。
　　 藍(lán)莓軟膠囊(bluebeery soft capsulem,簡稱BSC)是以越桔酒渣提取物為主要成分的產(chǎn)品,搞清楚其生物學(xué)活性對于指導(dǎo)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義。本文繼續(xù)將SHR大鼠誘導(dǎo)成高血壓高甘油三

8、酯合并的動物模型,以研究BSC對血壓和血脂的調(diào)節(jié)作用。研究參考文獻(xiàn)方法,利用高脂高糖飼料喂養(yǎng)SHR大鼠,同時(shí)每日定時(shí)灌胃BSC一次,觀察BSC對高甘油三酯SHR大鼠的影響。結(jié)果表明飼喂高脂高糖10周后,SHR大鼠血清TG水平顯著升高,同時(shí)每日灌胃BSC不能預(yù)防SHR大鼠TG的升高,但低劑量的BSC(250mg/kg bw)可以使SHR大鼠血清TG的增長緩慢。BSC可以顯著降低高甘油三酯SHR大鼠的血壓,降幅接近10％,起到改善血壓的作用