2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是豬氣喘病的主要病原體。該病分布廣泛,發(fā)病率高,自身致死率不高,但由于Mhp能破壞呼吸道黏膜.纖毛屏障,從而繼發(fā)其它致病菌的感染,提高致死率。由于早期檢測(cè)的困難和缺乏有效的藥物,在本病控制方面至今未能達(dá)到滿意的效果。本實(shí)驗(yàn)以Mhp168株為材料,研制出其特異性單克隆抗體,并利用該單克隆抗體建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,檢測(cè)豬肺炎支原體抗體,證明有一定的實(shí)用性。

2、 實(shí)驗(yàn)用KM<,2>培養(yǎng)基(含豬支原體抗體陰性血清)培養(yǎng)Mhp168株,高速離心收集菌體,用PBS懸浮沉淀。懸浮物反復(fù)凍融再超聲波裂解,用獲得的全菌抗原免疫BALB/c小鼠。取脾細(xì)胞與Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)間接ELISA和IHA篩選,有限稀釋法3次克隆,獲得了1株穩(wěn)定分泌抗Mhp單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,命名為3G5。經(jīng)亞類鑒定試劑盒測(cè)定,所產(chǎn)生的抗體為IgG型:經(jīng)ELISA方法測(cè)定,腹水效價(jià)為1:6400;通過Western-

3、blot、間接ELISA和IHA確定,該株單克隆抗體針對(duì)Mhp70kD左右的蛋白。 單抗經(jīng)硫酸錢鹽析法純化后,蛋白含量為4.37mg/mL。以Mhp全菌純化蛋白為包被抗原,利用該單克隆抗體與Mhp豬血清競(jìng)爭(zhēng)該抗原,建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)Mhp抗體。優(yōu)化的反應(yīng)條件為:Mhp蛋白抗原的最佳包被濃度為15μg/mL(1:800稀釋):?jiǎn)慰寺】贵w的工作濃度為10.9μg/mL(1:400稀釋);競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)作用時(shí)間為37℃lh:酶標(biāo)

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