內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關因子Hrd1在糖尿病鼠視網(wǎng)膜的表達變化.pdf

1、目的：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在糖尿病視網(wǎng)膜病的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用,而羥甲基戊二酰輔酶A 還原酶降解蛋白1（Hrd1）能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關蛋白降解途徑穩(wěn)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)環(huán)境從而減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的發(fā)生。本實驗通過基因芯片分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關因子的變化，并觀察Hrd1在糖尿病鼠視網(wǎng)膜和體外高糖培養(yǎng)人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞的表達變化，分析它在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生和發(fā)展中的作用。
　　 方法：腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)（65mg/kg）制作糖尿病SD 大鼠模型，

2、對照組大鼠腹腔注射同等劑量檸檬酸鈉溶液。于注射后72 小時用鼠尾采血法測量血糖，7天后以血糖值≥16.7mmol/L 認定為Ⅰ型糖尿病鼠建模成立，以后每周監(jiān)測血糖一次。模型成立三個月時取大鼠視網(wǎng)膜組織。用自行設計實時定量PCR芯片分析89個內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關因子的表達變化。用Western blot、免疫熒光檢測Hrd1在三月糖尿病模型鼠和對照組大鼠視網(wǎng)膜中的表達。對體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞，用高糖培養(yǎng)基干預48小時后，用免疫熒光檢測Hr

3、d1在細胞的表達變化。
　　 結果：在視網(wǎng)膜組織中：PCR芯片結果顯示，在這89個基因中，三個月糖尿病模型組有12個基因Mrna水平發(fā)生了變化，其中Hrd1表達下降，與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Western blot 顯示，三個月糖尿病模型組Hrd1 蛋白質(zhì)表達水平與對照組相比下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；免疫熒光顯示，F(xiàn)ITC 標記的Hrd1在糖尿病鼠視網(wǎng)膜中綠色熒光減弱，表明其蛋白質(zhì)表達下