不同成分的門靜脈血供對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、【目的】
　　1、建立操作簡便、穩(wěn)定可靠、重復性好的大鼠門靜脈動脈化模型(完全門靜脈動脈化及部分門靜脈動脈化)。
　　2、探討大鼠門靜脈接受不同血供(完全門靜脈血、門靜脈血及動脈血、完全動脈血)時對肝臟缺血再灌注損傷的影響。
　　【方法】
　　實驗一大鼠模型的建立與觀察:
　　1.1完全門靜脈動脈化(CPVA)模型:使用“”型同種異體血管材料(上端套袖套,下端結扎,側端曠置),以套入式縫合及袖套法建立大鼠模

2、型。切除左腎,將左腎動脈與門靜脈殘端借同種異體血管材料連接,左腎靜脈借袖套與腸系膜上靜脈連接。
　　1.2部分門靜脈動脈化(PPVA)模型:采用“”型同種異體血管材料(上、下端套袖套,側端曠置),以套入式縫合及袖套法建立大鼠模型。切除左腎,將左腎動脈與門靜脈殘端、腸系膜上靜脈借同種異體血管材料連接。
　　1.3觀察:70例SD大鼠隨機分成3組,完全門靜脈動脈化組30只、部分門靜脈動脈化組30只與對照組(僅切除左腎及游離門靜脈

3、第1屬支)10只。分析3組手術時間、出血量、門靜脈阻斷時間及存活率。
　　實驗二探討大鼠門靜脈接受不同血供時對肝臟缺血再灌注損傷的影響:
　　108例SD大鼠隨機分成CPVA組36只,PPVA組36只與對照組36只。術中確保第一肝門阻斷時間為25min,以誘導近似相同程度的肝臟缺血再灌注損傷。術后2h,6h,1d,3d,7d隨機抽取6只大鼠有創(chuàng)監(jiān)測門靜脈壓力,并觀察肝臟功能(外周血ALT、AST),血清一氧化碳(NO),血漿

4、ET-1變化,肝臟病理改變,及檢測肝組織p38MAPK磷酸化水平。
　　統(tǒng)計學處理
　　應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析,計量資料采用均數±標準差表示,多組間計量資料比較采用單因素方差分析及析因分析,進一步兩兩比較采用SNK檢驗法;動物生存時間采用累積生存曲線;率的比較采用χ2檢驗或者Fisher精確概率法檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　【結果】
　　實驗一大鼠模型的建立與觀察:
　　兩種模型均

5、造模成功。CPVA模型成功率96.7％(29/30),手術時間為(53±3.95)min,出血量約為1.1±0.4ml,門靜脈阻斷時間為(12.5±1.5)min。PPVA模型成功率100%(30/30),手術時間為(49.5±3.0)min,出血量約為0.97±0.33ml,門靜脈阻斷時間為(15.2±1.8)min。對照組成功率100%(30/30),手術時間為(23.9±1.85)min,出血量約為0.25±0.13ml,門靜脈不

6、需要阻斷。
　　與CPVA組相比,PPVA組術中出血量及術后7d累計生存率差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05),PPVA組手術時間要短,但門靜脈阻斷時間要長,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　實驗二大鼠門靜脈接受不同血供時對肝臟缺血再灌注損傷的影響:
　　2.1門靜脈壓力:CPVA組及PPVA組術后5個時間點門靜脈壓力與對照組比均明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PPVA組術后2h門靜脈壓力與CPVA組比明

7、顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.2血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)含量比較:CPVA組及PPVA組術后2h、6h、1d、3d的血清ALT、AST值與對照組比明顯下降。PPVA組術后2h、6h、1d、3d的血清ALT值及術后2h、6h的血清AST值與CPVA組比顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.3血清NO:CPVA組及PPVA組術后2h、6h、1d的血清NO值與對照組比明顯

8、下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PPVA組術后2h、6h、1d的血清NO值與CPVA組比較均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.4血漿ET-1:CPVA組及PPVA組術后2h、6h的血漿ET-1值與對照組比較明顯下降,且PPVA組在術后1d的血漿ET-1值與其相比仍有降低,而CPVA組術后7d的血漿ET-1值與其比更高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PPVA組術后2h、6h、1d、7d的血漿ET-1值

9、與CPVA組比較均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.5肝臟病理HE結果:對照組缺血再灌注損傷最嚴重,恢復最慢,可見大量肝細胞排列紊亂、明顯水腫、呈空泡變性,肝竇少量淤血伴大量中性粒細胞滲出及枯否細胞聚集,肝小葉結構不清,有少量液化壞死灶。CPVA組可見肝細胞輕微水腫,少量肝細胞呈空泡變性,肝竇輕微淤血,并可見中性粒細胞滲出及枯否細胞聚集,肝小葉結構不清?？梢姼渭毎瑺钜夯詨乃?。PPVA組缺血再灌注損傷最輕,恢

10、復最快,肝小葉、中央靜脈、匯管區(qū)結構清晰,肝細胞索排列整齊,少量炎性細胞浸潤;肝竇結構規(guī)則,肝竇內皮細胞無明顯腫脹變形,有輕度淤血。偶見肝細胞片狀液化性壞死。
　　2.6肝臟組織p38蛋白表達:CPVA組和PPVA組各個時間點pp38蛋白表達量呈現先增加后減少趨勢,其中表達高峰出現在術后6h。對照組各個時間點pp38蛋白表達量呈現遞減趨勢,術后1d后幾乎不表達。三組各個時間點p38蛋白表達沒有統(tǒng)計學差異。術后6h,CPVA組和PP