Interleukin23基因在畢赤酵母中的誘導(dǎo)表達(dá).pdf

1、背景：作為一個(gè)在結(jié)構(gòu)和功能上同白介素-12類似的細(xì)胞因子——白介素-23，在近期已經(jīng)成為細(xì)胞因子研究中的熱點(diǎn)。白介素-23是由活化的Ⅰ型巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞分泌，在記憶性T淋巴細(xì)胞的分化和增殖過(guò)程中起重要作用。它還是連接固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的橋梁。已有研究證實(shí)白介素-23與幾類炎性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，比如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腸炎、幽門桿菌引起的胃炎、牛皮癬、銀屑病等。白介素-23誘導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答的能力是其與炎性疾病發(fā)生相關(guān)的基礎(chǔ)

2、。此外，細(xì)胞因子白介素-23和白介素-12部分地決定了免疫應(yīng)答的走向是Th17還是Th1類型。越來(lái)越多的研究表明了細(xì)胞因子白介素-23在免疫系統(tǒng)中的重要作用。
　　 目的：為了進(jìn)一步研究白介素-23的免疫學(xué)功能，構(gòu)建了白介素-23畢赤酵母菌表達(dá)質(zhì)粒并進(jìn)行了表達(dá)。
　　 方法：使用Invitrogen公司的EasySelectTMPich-ia Exp ression Kit系統(tǒng)中的畢赤酵母菌株X-33和質(zhì)粒p-PICZα

3、-A，分別經(jīng)由載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)化、篩選、誘導(dǎo)和檢測(cè)等步驟獲得能夠表達(dá)白介素-23的酵母克隆。
　　 結(jié)果：通過(guò)overlap PCR，成功將白介素-23的兩個(gè)亞基p19、p40連接，并在兩亞基連接處添加有由5個(gè)柔性氨基酸構(gòu)成的連接子。將含有p19、p40 cDNA克隆至分泌型表達(dá)載體pPICZα-A。獲得的陽(yáng)性克隆，使用兔抗his一抗，行Western blot檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)的上清中僅在24h、36h誘導(dǎo)的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)中能檢測(cè)到72