利用SSR指紋技術(shù)構(gòu)建玉米品種指紋圖譜及遺傳多樣性研究.pdf

1、本研究從100對(duì)SSR引物中篩選出多態(tài)性好、重復(fù)性好、帶型清晰易于統(tǒng)計(jì)的20對(duì)SSR引物應(yīng)用于玉米自交系和雜交種的指紋圖譜構(gòu)建，并且建立了非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)體系。進(jìn)一步對(duì)自交系進(jìn)行了遺傳多樣性分析。主要研究結(jié)果如下：1.建立了適于玉米DNA分析的SSR技術(shù)體系：采用玉米種子DNA快速提取方法(提取液成份為：100mMTris-HCl(pH8.0)，50mMEDTA，100mMNaCl，1.5％SDS，氯仿抽提一次，去除蛋白質(zhì)，

2、得到了基本無(wú)降解、可以滿(mǎn)足SSR檢測(cè)的玉米籽?；蚪MDNA)；優(yōu)化了玉米的SSR反應(yīng)體系(20μl的反應(yīng)體積中包括2.0mmol/LMg2+，0.1mmol/LdNTPs，0.25μmol/L引物，0.5UTaqDNA聚合酶，10×PCRbuffer2.0μl和40ng模板DNA)；采用10％非變性丙烯酰胺凝膠電泳，穩(wěn)壓140V，3.5小時(shí)；采用改進(jìn)銀染法顯色。 2.探討了多重PCR技術(shù)：根據(jù)8對(duì)玉米SSR引物單一擴(kuò)增片段大小，

3、組成不同的引物組合進(jìn)行多重PCR反應(yīng)的研究。在與單一PCR相同的反應(yīng)條件下，28個(gè)雙重PCR組合出現(xiàn)三種情況：兩對(duì)引物均擴(kuò)增正常(12個(gè))、只有一對(duì)引物擴(kuò)增正常而另一對(duì)擴(kuò)增帶弱或未擴(kuò)增(6個(gè))、兩對(duì)引物均未擴(kuò)增帶或錯(cuò)誤擴(kuò)增(10個(gè))。這些篩選出的正常擴(kuò)增的組合可應(yīng)用于玉米DNA指紋庫(kù)構(gòu)建研究中。 3.引物的篩選：從100對(duì)SSR引物中篩選出20對(duì)能產(chǎn)生穩(wěn)定遺傳多態(tài)性的引物，從中選出多態(tài)性強(qiáng)的12對(duì)引物應(yīng)用到品種指紋構(gòu)建和純度檢測(cè)

4、，以及遺傳多樣性分析中。 4.自交系、雜交種指紋圖譜及純度檢測(cè)：找到了502、關(guān)17、Mo17、吉846、E28等自交系的特異指紋圖譜帶。利用bnlg1358/bnlg1018兩對(duì)引物組合即可將8個(gè)雜交種全部區(qū)分開(kāi)。 5.24份骨干自交系遺傳多樣性分析：共檢測(cè)到119個(gè)等位變異，平均每個(gè)位點(diǎn)的等位變異數(shù)為7.4375個(gè)，變化范圍3-11個(gè)。平均多態(tài)性信息量(PIC值)為0.794，變化范圍0.66(phi085)到0.8

5、8(bnlg2132)。所聚類(lèi)結(jié)果為：第一類(lèi)群包括U8112、黃C、昌7-2、X178；第二類(lèi)群包括齊318、齊319、旅9、E28；第三類(lèi)群包括oh43、關(guān)17、Mo17、自330、P138、丹340；第四類(lèi)群包括502、444、K12、吉853、黃早4、H21、lx9801、魯原92；第五類(lèi)群包括478、5003。除個(gè)別自交系外，此分類(lèi)結(jié)果與系譜來(lái)源基本一致。 6.研究了自交系的數(shù)目(X)與聚類(lèi)所需最小等位變異數(shù)(Y)的關(guān)系