鐵皮石斛種質(zhì)資源遺傳多樣性及HPLC指紋圖譜分析.pdf

1、本研究以不同產(chǎn)地鐵皮石斛作為試驗(yàn)材料，采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)鐵皮石斛種質(zhì)的遺傳多樣性和親緣關(guān)系進(jìn)行研究，為全面掌握鐵皮石斛種質(zhì)資源遺傳背景，篩選和培育優(yōu)良鐵皮石斛品種奠定基礎(chǔ)。以其中10個(gè)產(chǎn)地鐵皮石斛資源為試驗(yàn)材料，采用HPLC-UV法分別構(gòu)建鐵皮石斛莖、葉片指紋圖譜，并對(duì)鐵皮石斛不同部位HPLC指紋圖譜進(jìn)行研究；同時(shí)測(cè)定10個(gè)產(chǎn)地鐵皮石斛中主要藥用成分含量，研究鐵皮石斛主要藥用成分隨采收時(shí)期的變化情況。主要研究結(jié)果如下：
　

2、　1運(yùn)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)鐵皮石斛遺傳多樣性進(jìn)行了研究。利用100條ISSR引物篩選出12條多態(tài)性引物（占12%），共擴(kuò)增出167條DNA譜帶，其中多態(tài)性譜帶154條，多態(tài)性比率（PPB）為92.21%。利用POPGENE32軟件計(jì)算得出平均觀(guān)察等位基因（Na）為1.9701，平均有效等位基因數(shù)（Ne）為1.6408，平均Nei’s基因多樣性指數(shù)（H）為0.3646，平均Shannon’s信息指數(shù)（I）為0.5373。利用DPS軟件

3、得出20份試驗(yàn)材料的遺傳相似系數(shù)（GS）范圍為0.41~0.82，在聚類(lèi)分析過(guò)程中，鐵皮石斛種質(zhì)聚成一個(gè)大類(lèi)，進(jìn)一步分析表明，相近地區(qū)鐵皮石斛種質(zhì)沒(méi)有聚在一起。這些結(jié)果說(shuō)明試驗(yàn)收集的材料來(lái)源比較復(fù)雜，遺傳背景豐富。
　　2建立了鐵皮石斛資源HPLC指紋圖譜研究的方法。色譜條件如下：色譜柱：WatersC18柱（5μm，4.6×250mm），流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸（梯度洗脫），流速：0.8mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm，進(jìn)

4、樣量：20μL，柱溫：25℃，檢測(cè)時(shí)間：75min。
　　3得到了分離度較好的鐵皮石斛莖、葉片的HPLC指紋圖譜。標(biāo)定了鐵皮石斛莖指紋圖譜的14個(gè)共有峰（9號(hào)峰為柚皮素）；標(biāo)定了葉片的8個(gè)共有峰（8號(hào)峰為柚皮素）。通過(guò)指紋圖譜相似度分析表明，不同產(chǎn)地鐵皮石斛資源同一部位（莖、葉片）的 HPLC指紋圖譜具有較高的相似性，不同部位 HPLC指紋圖譜差異較大。
　　4不同產(chǎn)地鐵皮石斛藥用成分含量存在顯著差異。莖中多糖含量較高的有廣