斜紋夜蛾β-n-乙酰葡糖胺糖苷酶基因克隆及功能研究.pdf

1、斜紋夜蛾是一種世界分布的農(nóng)作物害蟲，寄主十分廣泛，給農(nóng)作物造成很嚴(yán)重的危害，化學(xué)農(nóng)藥防治斜紋夜蛾時(shí)間長并且使用種類多，致使斜紋夜蛾對(duì)多種殺蟲劑的敏感度降低，因此尋找有效的防治方法已成為當(dāng)務(wù)之急。本論文主要研究了斜紋夜蛾β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因SlNAG1、SlNAG2、SlNA G3和SlFDL在生長發(fā)育過程中的功能，為基于靶向幾丁質(zhì)代謝的新型藥劑的創(chuàng)制與開發(fā)提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫和斜紋夜蛾轉(zhuǎn)

2、錄組數(shù)據(jù)分析，并結(jié)合RACE技術(shù)，克隆了SlNA G1、SlNAG2、SlNAG3、SlFDL四個(gè)斜紋夜蛾β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因。其中SlNAG1、SlNAG2、SlNAG3、SlFDL ORF序列全長分別為1770 bp、1854 bp、2067bp、2583 bp，分別編碼590、618、689、861個(gè)氨基酸。
　　2.序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，四個(gè)SlNAGs基因都有兩個(gè)糖基水解酶20家族的兩個(gè)水解區(qū);系統(tǒng)發(fā)育分析表明斜紋夜蛾β

3、-N-乙酰葡糖胺糖苷酶分別屬于不同的亞族，SlNAG1屬于第Ⅰ亞族，SlNAG2屬于第Ⅱ亞族，SlNA G3和SlFDL都屬于第Ⅲ亞族，在斜紋夜蛾中沒有發(fā)現(xiàn)第Ⅳ亞族的β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因。
　　3.表達(dá)譜qRT-PCR結(jié)果表明:SlNAG1在斜紋夜蛾表皮中特異性表達(dá)，尤其在預(yù)蛹第1天表達(dá)量最高;SlNAG2主要在表皮和脂肪體中表達(dá)量較高，其中在蛹期第4天的表皮中達(dá)到峰值;SlNAG3和SlFDL相對(duì)而言表達(dá)量比較低，其中S

4、lNAG3在表皮中的表達(dá)在幼蟲每個(gè)齡期末期表達(dá)量升高，而SlFDL主要在脂肪體中表達(dá)。注射20E后表皮中的SlNAG1和SlNAG2都表現(xiàn)為上調(diào)作用，表明SlNAG1和SlNAG2與斜紋夜蛾幼蟲蛻皮相關(guān)。
　　4.以建立的表達(dá)譜為依據(jù)，對(duì)SlNAG1和SlNAG2兩個(gè)基因通過注射法進(jìn)行RNA干擾。結(jié)果表明兩個(gè)基因表達(dá)量都能被干擾，但是未發(fā)現(xiàn)表型異常的個(gè)體。
　　5.通過真核表達(dá)系統(tǒng)獲得重組SlNAG1和重組SlNAG2，經(jīng)S