木犀草素通過PI3K-Akt信號通路促進缺血-再灌注心臟和心肌細胞收縮-舒張功能的恢復(fù).pdf

1、目的：觀察木犀草素(luteolin， Lut)對離體缺血/再灌注心臟和心肌細胞收縮功能的恢復(fù)及凋亡的影響。以心功能、心肌梗死面積、酶學(xué)、單個心肌細胞的收縮功能、凋亡蛋白、抗凋亡蛋白以及收縮相關(guān)蛋白的表達為指標，研究木犀草素對缺血/再灌注損傷大鼠心肌細胞的保護作用及其機制，從而為臨床治療心肌缺血/再灌注損傷提供一種新的藥物。
　　 方法：
　　 1．清潔級成年雄性SD大鼠，分為正常對照組（Control, n=6），缺血

2、/再灌注損傷組(I/R, n=6)，木犀草素預(yù)處理組(I/R+Lut， n=6)，木犀草素+LY294002預(yù)處理組（I/R+Lut+ LY, n=6）。離體心臟連接Langendorff裝置，待心臟穩(wěn)定30min后：Control組離體心臟持續(xù)灌流200min； I/R組離體心臟持續(xù)灌流50min后，再缺血30min復(fù)灌120min； I/R+Lut組離體心臟持續(xù)灌流20min，進行木犀草素預(yù)處理30min后再缺血30min復(fù)灌120

3、min； I/R+Lut+LY組進行木犀草素預(yù)處理前用LY294002預(yù)處理20min，余處理同I/R+Lut組。同時檢測大鼠離體心功能的變化；各組復(fù)灌10min時，留取冠脈流出液待測LDH含量。冷凍心臟，測量各組心臟的心肌梗死面積。
　　 2．進一步酶解法分離正常雄性SD大鼠心臟，得單個心室肌細胞，并進行培養(yǎng)。Control組心肌細胞正常孵育18h； I/R組心肌細胞正常孵育13h后，行缺氧3h復(fù)氧2h模擬缺血/再灌注；I/R

4、+Lut組心肌細胞正常孵育1h后加入2，4，8,16μmol/L不同濃度的木犀草素進行預(yù)處理12h，再行缺氧3h復(fù)氧2h模擬缺血/再灌注損傷。I/R+Lut+LY組進行木犀草素預(yù)處理前用LY294002預(yù)處理1h，余處理同I/R+Lut組。最后測定這些細胞在異丙腎上腺素刺激(isoproterenol， ISO)狀態(tài)下收縮幅度，收集各組心肌細胞，Western blot檢查bcl-2、bax、Akt、p-Akt、SERCA2a、PLB及

5、p-PLB蛋白表達變化。
　　 結(jié)論：
　　 1．在離體器官水平上，與正常組相比較，缺血/再灌注能夠明顯地降低離體心功能的各種參數(shù)，增加冠脈流出液中LDH的釋放量，增加了心肌梗死面積。而木犀草素可減輕心肌損傷，改善大鼠心功能，減少LDH的釋放，降低心肌梗死面積，而用PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理后上述保護作用部分被阻斷。
　　 2．在細胞水平上，與正常組相比較，模擬缺血/再灌注顯著降低了心肌細胞收縮幅度，降

6、低了凋亡相關(guān)蛋白bcl-2的表達，增加了bax的表達，使得bcl-2/bax的比值降低，同時降低了收縮相關(guān)蛋白p-Akt、SERCA2a及p-PLB蛋白的表達。用不同濃度的木犀草素預(yù)處理后能夠不同程度地抑制細胞收縮幅度的降低，增加了bcl-2/bax的值，增加了收縮相關(guān)蛋白的表達，而用PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理后上述保護作用部分被阻斷。
　　 結(jié)論
　　 1．木犀草素可促進大鼠離體缺血/再灌注心臟和心肌細胞收縮