三氧化二砷與放射線聯(lián)合對(duì)食管癌細(xì)胞株-Eca109的增敏機(jī)制.pdf

1、目的：探討三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）及As2O3與放射線聯(lián)合對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞株的生長抑制作用；分析兩者聯(lián)合對(duì)Eca109細(xì)胞周期和凋亡的影響。為As2O3的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：（1）As2O3對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的抑制作用：采用MTT法檢測不同濃度As2O3（0.05μmol/L、0.10μmol/L、0.15μmol/L、0.20μmol/L、0.25μmol/L、0.

2、30μ mol/L、0.35
　　 μ mol/L、0.40μ mol/L、0.45μ mol/L、0.50μ mol/L），在不同時(shí)間段（12 h、24 h、48 h、72h）對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的抑制率；（2）放射線對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的抑制作用：采用MTT法檢測不同劑量的放射線（0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy），在不同時(shí)間段（12h、24h、48h、72h）對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的抑制率；（3）As

3、2O3聯(lián)合放射線對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的抑制作用：采用MTT法檢測兩種濃度的As2O3（0.20μmol/L、0.25μ mol/L）聯(lián)合（2Gy、4Gy）的放射線在不同的時(shí)間段（12h、24h、48h、72h）對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的抑制率；（4）As2O3聯(lián)合放射線對(duì)Eca109細(xì)胞周期及凋亡的影響：采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測0.20μ mol/L的As2O3聯(lián)合2Gy的放射線在不同時(shí)間（48h、72h）點(diǎn)對(duì)Eca109細(xì)胞周期及凋亡的影

4、響；（5）采用免疫印跡技術(shù)檢測0.20μ mol/L的As2O3聯(lián)合2Gy的放射線處理48h后，Eca109細(xì)胞中細(xì)胞色素c（cyt-c）和錳超氧化物歧化酶（Manganese superoxide dismutase，MnSOD）的表達(dá)變化情況。
　　 結(jié)果：（1）As2O3在0.05～0.50μ mol/L濃度范圍內(nèi)均能一定程度的抑制Eca109細(xì)胞的增殖，且隨著濃度增加和作用時(shí)間延長，對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用增強(qiáng)。濃度在0.0

5、5～0.20
　　 μ mol/L時(shí)，抑制率低，當(dāng)濃度大于0.25μ mol/L后，抑制率迅速升高。0.20～0.25μ mol/L是抑制率由低到高的緩沖區(qū)。（2）放射線在0.5～8Gy范圍內(nèi)均對(duì)Eca109細(xì)胞增殖有一定程度的抑制作用。其中在0.5～2Gy之間，抑制率低，當(dāng)劑量大于4Gy后，抑制作用明顯增強(qiáng)。2～4Gy是抑制率由低到高的緩沖區(qū)。（3）0.20μ mol/L、0.25μ mol/L濃度的As2O3分別聯(lián)合2Gy、

6、4Gy的放射線在各時(shí)間段（12h、24h、48h、72h）對(duì)Eca109細(xì)胞的抑制率較單純藥物組和單純照射組均高，并且抑制率大于單藥組和照射組的抑制率之和。隨著時(shí)間的延長，各個(gè)聯(lián)合組抑制率隨之升高。其中0.25μmol/L+4Gy聯(lián)合組在72h的細(xì)胞抑制率最大，為83.56％，與其它聯(lián)合組在對(duì)應(yīng)時(shí)間段相比較，有顯著性差異（P=0.0000.001）。而0.25μ mol/L+2Gy與0.20μ mol/L+4Gy兩組相比，在各對(duì)應(yīng)時(shí)間段

7、其抑制率無明顯差異（P=0.057～0.298）。（4）流式細(xì)胞技術(shù)檢測結(jié)果顯示：0.20μ mol/L+2Gy聯(lián)合組在72h的凋亡率最高，為12.26％，與單藥組和單純照射組比較，有顯著性差異（P=0.008～0.046）。聯(lián)合組在72h細(xì)胞周期改變也最為明顯，細(xì)胞被阻滯于G2/M期，該期所占比例為27.5％，與非聯(lián)合組比較有顯著性差異（P=0.000）。（5）Western blotting分析結(jié)果顯示，cyt-c在各組未發(fā)生明顯變

8、化（P=0.27～0.86），而MnSOD在各處理組中均有所降低，且0.20μ mol/L+2Gy聯(lián)合組降低最為明顯，兩兩比較均有顯著性差異（P=0.000～0.028）。
　　 結(jié)論：（1）As2O3能抑制食管癌Eca109細(xì)胞的增殖，具有明顯的量效和時(shí)效關(guān)系。（2）As2O3能提高放射線對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的抑制作用，有增敏作用。（3）As2O3可通過影響Eca109細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，來增強(qiáng)放射線對(duì)細(xì)胞的殺傷作用。（