飼用枯草芽孢桿菌的篩選及其發(fā)酵豆粕技術(shù)研究.pdf

1、本文主要研究?jī)?nèi)容是從健康仔豬糞便中針對(duì)性的篩選出飼料添加益生芽孢桿菌菌株并進(jìn)行相關(guān)鑒定，進(jìn)行體外性能評(píng)價(jià)，以豆粕為主要發(fā)酵基質(zhì)利用其進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，優(yōu)化發(fā)酵條件，從而制備以豆粕為載體的活菌菌劑。
　　本文以新鮮健康仔豬糞便為樣品，經(jīng)過(guò)低pH、高濃度膽鹽、抑菌性實(shí)驗(yàn)篩選及形態(tài)學(xué)、生理生化、分子生物學(xué)鑒定，篩選并命名出枯草芽孢桿菌2株（NCU901、NCU902）、地衣芽孢桿菌1株（NCU903）、短小芽孢桿菌1株（NCU904）。選取

2、抑菌性能最好菌株枯草芽孢桿菌NCU901進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
　　為確定枯草芽孢桿菌NCU901各生長(zhǎng)時(shí)期，對(duì)NCU901進(jìn)行為期120 h的生長(zhǎng)曲線繪制，得出NCU901延滯期時(shí)間較短為0～2 h，指數(shù)期為2~20 h，后20~120 h其存活率維持在較穩(wěn)定范圍內(nèi)。耐熱性實(shí)驗(yàn)表明，在40 ℃、60 ℃、80 ℃、100 ℃條件下分別處理不同時(shí)間，NCU901的死亡率都呈現(xiàn)起初短時(shí)間較高后降低的趨勢(shì)；不同溫度條件下處理20 min后

3、，40 ℃條件下存活率幾乎不受影響，60 ℃處理時(shí)存活率維持在52.75％，80 ℃存活率為33.46%，100 ℃存活率為24.42%。抑菌實(shí)驗(yàn)表明，NCU901對(duì)G＋與G－致病菌均有較強(qiáng)的抑制作用。NCU901的16 h無(wú)菌發(fā)酵液的抑菌性能最好，其中對(duì)G＋致病菌中的金黃色葡萄球菌26003的抑菌作用最強(qiáng)，抑菌圈達(dá)到21.5 mm，對(duì)G－致病菌中的阪崎腸桿菌CMCC45401的抑菌作用最強(qiáng)。胃腸道耐受性實(shí)驗(yàn)顯示，pH3.0對(duì)NCU90

4、1未有明顯影響，在pH2.0條件下處理5 h后，存活率為81.75%；在膽鹽質(zhì)量濃度為0.1%時(shí)NCU901存活率未受到影響，膽鹽濃度為0.5%處理5 h時(shí)，存活率為73.29%；體外胃腸液耐受性實(shí)驗(yàn)得出胃液處理4h后，活菌數(shù)有所提升，后經(jīng)過(guò)8h腸液耐受性實(shí)驗(yàn)，NCU901存活率較轉(zhuǎn)入胃液初存活率達(dá)到50.8%，較轉(zhuǎn)入腸液初存活率達(dá)到68.59%，活菌濃度為8.85 Lg(CFU/mL)，NCU901能夠較好的耐受胃腸液的殺菌作用。

5、r>　　以活菌數(shù)為指標(biāo)，利用NCU901進(jìn)行發(fā)酵豆粕實(shí)驗(yàn)研究。通過(guò)對(duì)單因素實(shí)驗(yàn)、正交實(shí)驗(yàn)及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)合發(fā)酵基質(zhì)的粘稠度及后續(xù)干燥工藝考慮，選取發(fā)酵條件為：發(fā)酵時(shí)間36 h、發(fā)酵溫度37 ℃、接種量6%、料液比1:0.8。烘箱干燥溫度由40 ℃升高到50 ℃，活菌數(shù)由10.62 Lg(CFU/g)降至10.45Lg(CFU/g)，但活菌數(shù)仍維持在較高水平；干燥溫度為60 ℃時(shí)，活菌數(shù)下降明顯，至9.76 Lg(CFU/g)；70 ℃