南蛇藤總萜誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制腫瘤血管生成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.研究南蛇藤總萜體外抑制鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞增殖，以及對(duì)其細(xì)胞凋亡的影響，為南蛇藤總萜對(duì)黑色素瘤抗瘤活性方面的研究奠定初步基礎(chǔ)。 2.探討南蛇藤總萜對(duì)人肝癌7721細(xì)胞增殖的影響，在非細(xì)胞毒濃度下研究南蛇藤總萜對(duì)人肝癌7721細(xì)胞同質(zhì)粘附和異質(zhì)粘附的影響，進(jìn)一步研究南蛇藤總萜抑制腫瘤粘附、侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制。 3.研究南蛇藤總萜對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vain endot

2、helialcells，HUVECs)增殖和凋亡的影響，探討其抑制腫瘤血管生成的可能機(jī)制。 方法： 1.MTT法檢測(cè)南蛇藤總萜對(duì)鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞、人肝癌7721細(xì)胞和HUVECs增殖的影響。 2.流式細(xì)胞儀法檢測(cè)南蛇藤總萜對(duì)鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞和HUVECs凋亡的影響。 3.通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度(OD值)的變化，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞間的粘附能力，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附能力，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞與H

3、UVECs的粘附能力。 4.采用流式細(xì)胞術(shù)，通過(guò)間接熒光標(biāo)記法測(cè)定人肝癌細(xì)胞MMP-2蛋白和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2蛋白的變化。 5.ELISA法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothetial growth factor，VEGF)含量的變化。 結(jié)果： 1.MTT結(jié)果顯示，不同濃度南蛇藤總萜能夠抑制鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞、人肝癌7721細(xì)胞和HUVECs增殖，存在量效關(guān)系。

4、2.流式細(xì)胞儀法檢測(cè)結(jié)果顯示，南蛇藤總萜能夠誘導(dǎo)鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞和HUVECs凋亡，存在時(shí)間依賴(lài)性和劑量依賴(lài)性。 3.選取其非細(xì)胞毒濃度進(jìn)行腫瘤粘附、侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)試驗(yàn)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，不同濃度的南蛇藤總萜可以促進(jìn)肝癌7721細(xì)胞間的同質(zhì)黏附。 4.試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，南蛇藤總萜能明顯抑制肝癌7721細(xì)胞侵襲基底膜成份Matrigel的能力，其黏附抑制率與藥物劑量呈正相關(guān)。 5.試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，南蛇藤總萜能明顯

5、抑制肝癌7721細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力，其黏附抑制率與藥物劑量呈一定相關(guān)性。 6.流式細(xì)胞儀結(jié)果分析表明，南蛇藤總萜能夠下調(diào)MMP-2蛋白的表達(dá)，與對(duì)照組相比，存在差異性(P<0.05)。當(dāng)藥物濃度不斷增大時(shí)，其FI值逐步下降，與藥物劑量呈一定的相關(guān)性。 7.結(jié)果顯示，不同濃度的南蛇藤總萜能夠下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，與血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡存在一定的相關(guān)性。 8.ELISA結(jié)果顯示，南蛇藤總萜能夠明顯降低細(xì)胞因

6、子VEGF的含量，與對(duì)照組相比，存在顯著性差異(P<0.05)。隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞因子VEGF的含量在逐步的減少，與藥物的劑量存在一定的量效關(guān)系。 結(jié)論： 1.南蛇藤總萜體外能夠抑制鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞增殖，(并)誘導(dǎo)其細(xì)胞凋亡，對(duì)黑色素瘤表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗瘤活性，值得深入研究。 2.南蛇藤總萜能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的同質(zhì)粘附，抑制腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)粘附，在腫瘤的粘附、侵襲和血管生成方面表現(xiàn)出很好的活性，其機(jī)制可能

7、與下調(diào)MMP-2和VEGF的表達(dá)有一定的相關(guān)性。 3.南蛇藤總萜能夠抑制HUVECs增殖并能誘導(dǎo)其凋亡，這與下調(diào)癌基因蛋白Bcl-2可能存在一定的相關(guān)性。 4.本研究發(fā)現(xiàn)，南蛇藤抗腫瘤活性成份目前主要為南蛇藤總萜，在抑制腫瘤粘附、侵襲和腫瘤血管生成方面，表現(xiàn)出很好的活性，可能與“P53-VEGF-VEGFR”通路有一定的相關(guān)性，其機(jī)制值得更進(jìn)一步深入研究。南蛇藤總萜極有希望開(kāi)發(fā)成為具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的一種理想抗腫瘤血管