萵苣過(guò)氧化物酶基因克隆及其在種子萌發(fā)中的功能研究.pdf

1、隨著ROS（O2?—、?OH、H2O2等）在細(xì)胞壁松弛中作用的確立，過(guò)氧化物酶（Peroxidase，POD）作為參與合成調(diào)節(jié) ROS的主要酶類(lèi)一直被人們所熱議。已報(bào)道的多篇文章都提出POD在種子萌發(fā)和胚根伸長(zhǎng)中活性發(fā)生了變化，POD是否在種子萌發(fā)中起作用，起什么作用，與胚根伸長(zhǎng)和胚乳弱化各有什么關(guān)系，都不是很清楚，所以本文主要針對(duì)POD在種子萌發(fā)中發(fā)揮的功能而作出研究。
　　本文以萵苣（Lactuca sativaL.）種子為材

2、料，用分光光度法檢測(cè)在不同萌發(fā)介質(zhì)中，胚根（Radical，RAD）和胚乳帽(Endosperm cap，CAP)中POD酶活性變化。在水中萌發(fā)時(shí)，RAD和CAP的POD酶活均表現(xiàn)出持續(xù)升高，且CAP中酶活明顯高于RAD。在0.3％二氯異氰尿酸鈉（Sodium dichloroisocyanurate，SDIC）溶液中萌發(fā)的種子，其完成萌發(fā)的起始時(shí)間點(diǎn)推遲，RAD中POD酶活性未變，CAP中酶活性顯著下降。在水楊羥肟酸（Salicylh

3、ydroxamic acid，SHAM）的0.3mM水溶液中萌發(fā)的種子，起始萌發(fā)時(shí)間點(diǎn)提前，CAP與RAD共同表現(xiàn)出POD酶活性的顯著下降。用3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine，TMB）組織染色POD結(jié)果顯示，POD存在于整個(gè)胚乳和胚根部位，各部分的染色深淺變化與分光光度計(jì)測(cè)得 POD酶活性變化一致。
　　通過(guò)搜索得到POD EST序列，用cDNA末端快速克?。≧apid

4、-amplification of cDNA ends，RACE）的技術(shù)擴(kuò)增出該P(yáng)OD的完整cDNA，全長(zhǎng)1259bp，并命名為L(zhǎng)sPOD1。利用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）技術(shù),檢測(cè)三種萌發(fā)介質(zhì)中不同吸脹時(shí)間的RAD和CAP中POD轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。結(jié)果顯示，在水中吸脹的種子中，CAP和RAD的LsPOD1表達(dá)量都隨著吸脹時(shí)間的