酶法修飾灰樹(shù)花多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其抗氧化活性研究.pdf

1、灰樹(shù)花(Grifola frondosa)是一種大型藥食兼用珍稀菌,主要分布于亞熱帶至溫帶,又名栗蘑、貝葉多孔菌等。研究表明,灰樹(shù)花子實(shí)體中的多糖具有多種生物活性,如抗腫瘤、抗氧化、增強(qiáng)免疫、抗高血壓、降低血糖和血脂等。近年來(lái)酶法在中藥提取中的應(yīng)用已顯示出明顯的優(yōu)勢(shì),酶法可以破壞植物細(xì)胞壁,有利于對(duì)有效成分的提取。已有研究表明灰樹(shù)花多糖的分子量較大,且低分子量灰樹(shù)花多糖顯示出較好的抗腫瘤等方面的生物活性。而目前對(duì)酶法提取灰樹(shù)花多糖的研究

2、很少,且未見(jiàn)酶解灰樹(shù)花多糖結(jié)構(gòu)鑒定及抗氧化活性的報(bào)道。因此,本論文對(duì)比研究熱水及復(fù)合酶法提取灰樹(shù)花子實(shí)體多糖,并對(duì)其純化、結(jié)構(gòu)表征及抗氧化活性進(jìn)行研究,為灰樹(shù)花多糖功能食品和藥品的研究開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　 1.水提及酶法提取灰樹(shù)花多糖的工藝研究。提取工藝條件為料液比1:10、3％的單一酶(纖維素酶、果膠酶或胰酶)或復(fù)合酶(纖維素酶:果膠酶:胰酶=2:2:1)、溫度100℃、時(shí)間3 h、提取3次,該工藝

3、條件下,熱水提取灰樹(shù)花粗多糖(GFP)的得率為13.9％,多糖含量21.3％；單一酶法提取灰樹(shù)花粗多糖的得率分別為18.6％、19.3％和21.4％,多糖含量分別為34.6％、31.8％和36.5％；而復(fù)合酶法提取灰樹(shù)花多糖(FGFP)的得率和含量分別為21.2％和39.6％。與水提法相比,復(fù)合酶法提取多糖的得率和含量均為水提的近2倍,說(shuō)明復(fù)合酶法適合灰樹(shù)花多糖的提取。
　　 2.水提及復(fù)合酶法提取灰樹(shù)花多糖的分離純化。經(jīng)三氯乙

4、酸脫蛋白,DEAE-52纖維素和Sephacryl S-500HR凝膠柱分離得到3個(gè)灰樹(shù)花多糖組分(GFP-11、GFP-22和GFP-33)和2個(gè)復(fù)合酶解多糖組分(FGFP-11和FGFP-22)。各組分多糖在HPLC圖譜上呈單一對(duì)稱峰,表明多糖各組分為均一多糖組分。
　　 3.多糖各組分的分子量和單糖組成測(cè)定。采用高效液相色譜法和氣相色譜法測(cè)定各組分多糖的分子量和單糖組成,結(jié)果表明,水提灰樹(shù)花多糖組分GFP-11、GFP-2

5、2和GFP-33分子量分別為1907655,1945360和2655828；復(fù)合酶提多糖組分FGFP-11和FGFP-22分子量分別為59815和110496。GFP-11由甘露糖,葡萄糖和半乳糖組成,其摩爾比為甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1:2.0284:9.2507；GFP-22是由葡萄糖和半乳糖組成,其摩爾比為葡萄糖:半乳糖=1:30.9625；GFP-33是由甘露糖組成。FGFP-11由甘露糖,葡萄糖和半乳糖組成,其摩爾比為甘露糖:

6、葡萄糖:半乳糖=1:16.3579:5.2486:FGFP-22是由葡萄糖組成。
　　 4.多糖各組分的結(jié)構(gòu)表征。運(yùn)用紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)及剛果紅試驗(yàn)等現(xiàn)代分析方法和理化分析手段對(duì)水提多糖(GFP-11、GFP-22和GFP-33)及復(fù)合酶解多糖(FGFP-11和FGFP-22)進(jìn)行表征,并通過(guò)核磁共振(13C-NMR和1H-NMR)分析組分FGFP-11的結(jié)構(gòu)。IR結(jié)果表明,各組分多糖均具有多糖的特征吸收峰；NM

7、R確定了純化組分FGFP-11多糖結(jié)構(gòu)中存在α糖苷鍵構(gòu)型；剛果紅實(shí)驗(yàn)證明,GFP-11、GFP-22和FGFP-11均具有三螺旋立體構(gòu)型。
　　 5.灰樹(shù)花及復(fù)合酶解多糖純化前后的抗氧化活性研究?；覙?shù)花及復(fù)合酶解多糖純化前后對(duì)三種自由基(·OH、DPPH·、ABTS+)均有一定的清除作用,且復(fù)合酶解FGFP及純化后組分FGFP-11的抗氧化活性明顯優(yōu)于酶解前GFP。相關(guān)性分析表明復(fù)合酶解多糖較高的抗氧化活性與其較低的分子量有較好