蟬蛻抗支氣管哮喘作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：支氣管哮喘是常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，屬于中醫(yī)的“哮病”范疇。近年來，隨著大氣污染嚴(yán)重，支氣管哮喘成為全球性的嚴(yán)重健康難題，全世界絕大部分國家的各年齡層的人群均受到該疾病的困擾?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對本病的研究雖已取得一定的成果，但也存在著爭議。中藥治哮病歷史悠久。蟬蛻“止咳平喘，主治咳嗽氣喘證”，在臨床中廣泛應(yīng)用，取得很好治療效果。本文研究證實(shí)蟬蛻水提物具有抗支氣管哮喘的作用，并圍繞哮喘發(fā)病機(jī)理，探討其可能的作用機(jī)制，以期為臨床用藥提供理論依

2、據(jù)。 方法： 1 蟬蛻鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 (1)鎮(zhèn)咳作用采用濃氨水噴霧法，把40只合格小鼠隨機(jī)分為四組：模型對照組(model control group，M)、蟬蛻水提物高劑量組(high-dose Periostracum Cicadae extractgroup，H)，蟬蛻水提物低劑量組(low-dose：Periostracum Cicadae extract group，L)和咳必清

3、對照組(pentoxyerine control group，P)，記錄小鼠從接受噴霧開始到出現(xiàn)咳嗽的潛伏期，以及2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。 (2)祛痰作用采用氣管段酚紅法，把60只小鼠隨機(jī)分為四組：M、H、L和甘草片對照組(FG)。根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線，折算出酚紅含量(ug/ml)。比較各給藥組之間酚紅排泌量的差異。 (3)平喘作用采用噴霧致喘法，合格豚鼠32只隨機(jī)分為四組：M、H、L和氨茶堿對照組(aminophylline

4、 control group，A)，每組8只。以溴化乙酰甲膽堿(acetylcholine bromide，Ach)和(或)磷酸組胺(histamine phosphate，His)定量恒壓噴霧5s，記錄每只豚鼠的引喘潛伏期。 2 蟬蛻對豚鼠離體氣管環(huán)作用實(shí)驗(yàn)研究 取400～550g豚鼠用木捶猛擊頭部致昏，迅速分離氣管，制成3～5mm左右的氣管環(huán)。置于含改良的Krebs營養(yǎng)液15ml的浴槽中，浴液溫度保持37℃，持續(xù)通以

5、95％O<,2>+5％CO<,2>的混合氣體，平衡1.5h，靜息張力2g，每15min更換K-R液一次。然后進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：(1)蟬蛻水提物(CPE)對豚鼠離體氣管基礎(chǔ)張力的影響；(2)CPE對His或Ach收縮反應(yīng)的拮抗作用及時(shí)效曲線的影響；(3)CPE對累加法作His或Ach收縮離體氣管平滑肌量效曲線的影響。 3 蟬蛻對哮喘大鼠血清和肺組織形態(tài)學(xué)影響及其藥理機(jī)制探討 采用卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)致敏激發(fā)大

6、鼠哮喘模型，建立正常對照組(normal control group，N)、哮喘模型組(model group，M)、H、L及地塞米松對照組(Dexcmethasone control group，Dex)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，斷頭取血，采用放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)測定各組大鼠血清中白細(xì)胞介素2(Interleukin 2，IL-2)、白細(xì)胞介素5(Interleukin 5，IL-5)、一氧化氮(nitric

7、 oxide，NO)、一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase，NOS)、血栓素B<,2>(TXB<,2>)、6-酮-前列腺素F<,1α>(6-keto—PGFla)的含量。并取肺組織用蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin，HE)染色后，觀察比較大鼠支氣管及其周圍組織形態(tài)學(xué)的改變。 結(jié)果： 1 蟬蛻鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 (1)鎮(zhèn)咳作用結(jié)果可見，H組(38.60±8.3

8、2)、L組(32.20±14.01)與M組(18.70±9.21)相比小鼠咳嗽潛伏期均明顯延長(P<0.01，P<0.05)：H組(8.10±3.25)、L組(8.90±3.57)與M組(12.70±6.11)相Lgd,鼠2min內(nèi)咳嗽次數(shù)均明顯減少(P<0.01，P<0.05)。 (2)祛痰作用結(jié)果可見，H組(0.95±0.61)、L組(1.00±0.55)與M組(0.54±0.32)相比均能增加小鼠酚紅排泌量(即氣管段排痰量

9、)，具有明顯的意義(P<0.05)。L組促進(jìn)氣管段酚紅排泌量優(yōu)于H組，建議蟬蛻用于祛痰作用時(shí)可適當(dāng)降低用量。 (3)平喘作用 ①CPE對4％Ach誘導(dǎo)豚鼠哮喘作用結(jié)果可見：H組(75.50±12.28)、L組(71.83±21.76，)與M組(58.83+21.20)相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，即CPE對4％Ach誘導(dǎo)豚鼠哮喘模型未發(fā)現(xiàn)有平喘作用。 ②CPE對2％Ach和O.1％His等量混合液誘導(dǎo)豚鼠哮

10、喘作用結(jié)果顯示：H組(94.50±9.09)與M組(78.67±16.57)相比，對2％Ach和0.1％His的等量混合液誘導(dǎo)的豚鼠哮喘模型，H組能使哮喘潛伏期明顯延長(P<0.05)，抑制哮喘反應(yīng)級數(shù)，具有明顯的平喘效果。 2 蟬蛻對豚鼠離體氣管環(huán)作用實(shí)驗(yàn)研究 (1)CPE對靜息狀態(tài)下的離體氣管平滑肌沒有作用，與蒸餾水對照組相比差異不大，沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)CPE對His和Ach引起的豚鼠支氣管平滑肌

11、收縮沒有拮抗作用，與蒸餾水對照組相比沒有顯著性意義，不存在時(shí)效關(guān)系和量效關(guān)系。 3 蟬蛻對哮喘大鼠血清和肺組織形態(tài)學(xué)影響及其藥理機(jī)制探討 (1)體征觀察OVA敏化大鼠表現(xiàn)為前10min煩躁不安、活動(dòng)頻繁，后20min靜伏不動(dòng)、毛發(fā)豎立、萎靡不振，嚴(yán)重者出現(xiàn)伸頸、縮胸、收腹等明顯喘息癥狀。表明造模成功。 (2)蟬蛻對哮喘大鼠模型支氣管和肺組織形態(tài)學(xué)影響N組：支氣管，肺組織結(jié)構(gòu)正常，各級支氣管上皮完整，管腔內(nèi)無粘液滲

12、出，炎性細(xì)胞浸潤少見。M組：支氣管粘膜上皮細(xì)胞嚴(yán)重壞死，脫落，管腔狹窄管壁不光滑，甚則部分上皮缺如，粘液腺增生，基底膜增厚，管腔內(nèi)有大量粘液滲出，支氣管、肺組織內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞浸潤，且以Eos為主。管周輕度充血、水腫，血管擴(kuò)張。Dex組：肺部基本正常，支氣管上皮粘膜完整，腔內(nèi)無滲出物，有時(shí)可見杯狀細(xì)胞增生和輕度炎癥細(xì)胞浸潤。H組：大劑量治療組同M組相比，大鼠支氣管，肺組織炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，管壁基本光滑，管腔內(nèi)滲出物減少，基底膜增生減

13、輕。L組：組織學(xué)表現(xiàn)基本同H組，支氣管上皮完整，管腔分泌物少，少量炎癥細(xì)胞浸潤，基底膜增生不明顯。 (3)蟬蛻對哮喘大鼠血清中生化指標(biāo)影響 ①蟬蛻對哮喘大鼠血清中IL-2、5的影響結(jié)果顯示：M組大鼠血清中IL-2、5(10.96±0.94、31.13±2.23)與N組(7.73±0.81、20.19±1.52)比較明顯升高，差異有顯著性(P<0.01)。H組(9.45±0.94、27.72±1.77)與M組(10.96±

14、0.94、31.13±2.23)相比血清中IL-2、5的含量均有明顯降低，具有顯著性意義(P<0.01)。L組(9.94+1.0 1、28.70±1.58、)與M組(10.96±0.94、31.13±2.23)相比，血清中IL-2、5的含量也明顯降低，具有明顯意義(P<0.05)。 ②蟬蛻對哮喘大鼠血清中NO、NOS的影響結(jié)果顯示：M組(92.17±15.67)與N組(36.76±8.32)血清中NO水平比較，明顯升高，差異有顯

15、著性(P<0.01)。H組(59.09+9.62)、L組(65.16+7.46)與M組(92.17±15.67)相比，血清中的NO含量均有明顯降低，具有顯著性意義(P<0.01.P<0.05)。M組(21.15±2.84)與N組(19.03±1.91)血清中NOS水平比較，差異沒有顯著性(P>0.05)；而各給藥組與M組血清中NOS的水平?jīng)]有明顯的差異，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 ③蟬蛻對哮喘大鼠血清中TXB<,2>和6-keto*PGF

16、<,1α>影響結(jié)果顯示：M組(6.38±2.44)較N組(0.90±0.18)血清中TXB<,2>/6-Keto-PGF<,1α>。 結(jié)論： 1 在整體水平，CPE具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，其鎮(zhèn)咳、祛痰作用更為明顯。 2 CPE對于靜息狀態(tài)下的豚鼠支氣管平滑肌的基礎(chǔ)張力沒有影響，并且對His和Ach引起的豚鼠支氣管平滑肌收縮沒有拮抗作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其對整體動(dòng)物的平喘作用并不是通過直接舒張支氣管平滑肌發(fā)揮作用。

17、 3 CPE能夠降低過敏反應(yīng)大鼠血清中致炎因子IL-2、5的水平，影響信號分子NO，減少炎癥介質(zhì)(PGs，TXB<,2>)釋放及對周圍組織的浸潤，從而改善支氣管、肺組織形態(tài)學(xué)病理改變，降低氣道高反應(yīng)(air way hyperactivity，AHR)。 本文提示CPE在整體水平具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，但其抗支氣管哮喘的藥理機(jī)制并不是通過直接擴(kuò)張支氣管平滑肌作用來實(shí)現(xiàn)的，可能是通過降低致炎因子(IL-2、5)和炎癥介質(zhì)(