Apodemus胚胎干細(xì)胞和人胚胎干細(xì)胞向中胚層分化的研究.pdf

1、胚胎干細(xì)胞是來(lái)源于胚胎時(shí)期囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的一種多潛能干細(xì)胞，能在體外自我更新，并且可以誘導(dǎo)分化為內(nèi)胚層、中胚層和外胚層三個(gè)胚層來(lái)源的細(xì)胞，其中中胚層來(lái)源的細(xì)胞如脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和肌細(xì)胞等是目前細(xì)胞替代治療和組織工程中重要的種子細(xì)胞，因而在基礎(chǔ)研究和臨床治療中都有很好的應(yīng)用前景。目前，體外中胚層來(lái)源的細(xì)胞主要由間質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來(lái)，這是因?yàn)殚g質(zhì)干細(xì)胞具有取材方便，分離培養(yǎng)簡(jiǎn)單，多種分化潛能和免疫調(diào)節(jié)等優(yōu)點(diǎn)，但是間質(zhì)干細(xì)胞自身也

2、存在著一些缺點(diǎn)，例如相對(duì)低的生產(chǎn)率，大約100，000個(gè)細(xì)胞中才有1個(gè)真正的干細(xì)胞；自我更新能力有限，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，增殖潛能及向特定細(xì)胞分化的能力均消失殆盡。因而，仍需要發(fā)展一種新的細(xì)胞資源，所以是否能從胚胎干細(xì)胞中得到間質(zhì)干細(xì)胞或其他中胚層來(lái)源的細(xì)胞理所當(dāng)然的成為人們關(guān)注的新目標(biāo)。所以，為了更好的探討胚胎干細(xì)胞向中胚層分化的問(wèn)題，本研究利用已有的兩種胚胎干細(xì)胞一Apodemus和人胚胎干細(xì)胞，來(lái)分別研究它們向中胚層分化。首先應(yīng)用

3、Apodemus胚胎干細(xì)胞，建立了生成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和心肌細(xì)胞的體外分化模型，其次利用人胚胎干細(xì)胞，建立了一種獲得人胚胎干細(xì)胞來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞的新方法。 因此本研究分為兩個(gè)部分： 第一部分為Apodemus胚胎干細(xì)胞向中胚層誘導(dǎo)分化的研究。這部分內(nèi)容主要包括：首先通過(guò)利用懸滴和懸浮培養(yǎng)方法，Apodemus胚胎干細(xì)胞形成擬胚體，然后通過(guò)不同的誘導(dǎo)液，擬胚體分別誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和心肌細(xì)胞

4、，最后這四種分化形成的細(xì)胞通過(guò)組化染色，細(xì)胞免疫染色及RT-PCR來(lái)進(jìn)行鑒定。 第二部分為從分化的人胚胎干細(xì)胞中分選間質(zhì)干細(xì)胞的研究。這部分內(nèi)容主要包括：首先通過(guò)懸滴和懸浮培養(yǎng)方法，人胚胎干細(xì)胞形成擬胚體，接著擬胚體貼壁分化14天，然后利用C0271磁珠分選，從分化的人胚胎干細(xì)胞得到CD271陽(yáng)性細(xì)胞，最后分選得到的陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行包括生長(zhǎng)周期、細(xì)胞核型、成瘤性、表面抗原和多向分化潛能等在內(nèi)的多種生物特性方面的檢測(cè)。 結(jié)論：

5、 1.分化的人胚胎干細(xì)胞經(jīng)CD271磁珠分選得到陽(yáng)性細(xì)胞。CD271陽(yáng)性細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)與BMMSCs相似，為長(zhǎng)梭形，且能在體外擴(kuò)增20代左右。 2.該細(xì)胞群體倍增時(shí)間為25.88小時(shí)，比BMMSCs增殖速度稍慢。 3.該細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中保持正常的核型并且沒(méi)有成瘤性。 4.表面抗原分析表明該細(xì)胞表達(dá)間質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)的表面分子，而不表達(dá)造血細(xì)胞的某些特異性表面分子。 5.該細(xì)胞在體外能夠分化為脂肪細(xì)