火龍果抗旱相關(guān)MYB基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、干旱是人類面臨的主要自然災(zāi)害，它影響植物生長和發(fā)育，從而使各種經(jīng)濟(jì)作物產(chǎn)量嚴(yán)重下降，是影響植物生長發(fā)育的最主要逆境因子之一。火龍果（Hylocereus undatus）在經(jīng)濟(jì)和生態(tài)上都有很高的價值，是近年來廣泛關(guān)注的一種新興熱帶亞熱帶果樹，已成為貴州省喀斯特高溫干旱地區(qū)正在開發(fā)的新、特、優(yōu)農(nóng)業(yè)項(xiàng)目。實(shí)驗(yàn)室已有研究表明，火龍果的抗旱基因資源尤其豐富。開展火龍果抗旱基因資源的挖掘，對于火龍果種質(zhì)資源的保護(hù)和種質(zhì)創(chuàng)新具有重要意義。本文以火龍

2、果為材料，進(jìn)行了抗旱相關(guān)MYB基因的克隆及其表達(dá)特性研究，主要結(jié)果如下：
　　1、RT-PCR克隆了火龍果泛素（UQT）基因和核糖體RNA基因（18s rRNA），其表達(dá)分析結(jié)果表明，此2基因表達(dá)穩(wěn)定，表達(dá)量幾乎不受外界因素的誘導(dǎo)，可作為內(nèi)參基因研究火龍果逆境脅迫下基因的表達(dá)分析，分別將其命名為 HuUQT和Hu18s rRNA。
　　2、在Microarray數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，采用RT-PCR方法克隆了火龍果參與抗旱脅迫相關(guān)M

3、YB基因片段（408 bp），命名為HuMYB。該基因編碼的氨基酸與梅花（Prunus mume）PmMYB的相似性最高（64％）。
　　3、半定量 RT-PCR和熒光定量 PCR分析火龍果HuMYB在脅迫中的表達(dá)特性。研究表明，HuMYB的表達(dá)受干旱脅迫和低溫脅迫的影響，在同種脅迫條件不同脅迫時間下的基因表達(dá)量存在差異。隨著處理時間的增長，HuMYB在兩種脅迫中的表達(dá)量均較 CK降低，在干旱脅迫下呈“上升-下降-上升-下降”的表

4、達(dá)趨勢，且在24 h和7 d表達(dá)最高，在20 d表達(dá)最低。而在低溫脅迫下的表達(dá)持續(xù)降低，在兩個火龍果種質(zhì)（白肉品種和紅肉品種）的表達(dá)均在48 h時明顯降低，且在紫紅龍中的表達(dá)量降低較明顯。
　　4、采用熒光定量PCR技術(shù)，分析HuMYB、bHLH和GR在同一個干旱脅迫點(diǎn)不同種質(zhì)中的表達(dá)特性。結(jié)果表明，這3個基因在5個種質(zhì)（紅龍果、紅龍、B7、B4及紫紅龍）中的表達(dá)均存在明顯差異。HuMYB、bHLH在紫紅龍中表達(dá)最高，在紅龍中表達(dá)

5、最低；GR在 B中表達(dá)最高，在紅龍果、紅龍、B7和紫紅龍中表達(dá)無明顯差異。從整體來看，三個基因之間，在火龍果種質(zhì)中表達(dá)量最高的是GR，其次是HuMYB，表達(dá)量最低的是bHLH。三個基因在紫紅龍中表達(dá)相對較高。
　　5、Real-time PCR分析結(jié)果表明了HuMYB與HuMYC在果實(shí)中表達(dá)存在明顯差異，HuMYB的表達(dá)量隨發(fā)育時間的增加而增加，且HuMYB在紅肉20 d的表達(dá)水平最高，在白肉5 d中的表達(dá)水平最低；而HuMYC隨