大鼠Fas基因克隆及重組真核表達載體的構(gòu)建.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠Fas基因克隆及重組真核表達載體的構(gòu)建姓名：羅鳴申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)外科指導(dǎo)教師：劉偉國20060411浙江大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文礎(chǔ)研究的Fas基因體外制備及其真核表達載體的構(gòu)建的研究是一項關(guān)鍵而重要的任務(wù)。不僅如此，目前對Fas基因更深入的研究，例如：對F髂介導(dǎo)的細胞凋亡的抵抗現(xiàn)象，以及不同類型的膠質(zhì)瘤存在多種基因的聯(lián)合表達現(xiàn)象口。1∞等。這許多未認(rèn)知現(xiàn)象，要求我們更進一步對Fas基因進行探索，而探索之

2、路的大門便是Fas基因的制備以及真核表達載體的構(gòu)建。國內(nèi)對于Fas基因與膠質(zhì)痛關(guān)系的研究早在6年前就已經(jīng)開始，近3年開展的更為廣泛而深入。相比較之下，基因制備和構(gòu)建表達載體的工作顯得相對滯后了，2002年胡中波n”等報道成功制備了一種小鼠可溶性鼬cDNA，它是一種缺乏跨膜區(qū)的FascDNA，它表達的可溶性Fas蛋白可以與F鵲配體(FasL)特異性結(jié)合，并使之失去誘導(dǎo)凋亡的作用，從而避免細胞凋亡程序的啟動。此后，關(guān)于Fas基因克隆的研究就

3、再無報道，大鼠Fas基因全序列的克隆國內(nèi)還是空白。通過本實驗，對分子克隆方法制備基因并構(gòu)建表達載體進行一系列的摸索和嘗試，逐步積累了實踐經(jīng)驗。我們完整克隆大鼠Fas基因，并且構(gòu)建一系列常用真核表達載體，希望通過我們的實驗為今后各種研究提供合適的可表達基因。這是深入研究Fas基因表達規(guī)律及誘導(dǎo)凋亡作用的基礎(chǔ)，也是對基因治療膠質(zhì)瘤進行探索的基石。我們希望通過我們的研究，能為尋求膠質(zhì)瘤治療的新方法，進而攻克這一顱內(nèi)惡性腫瘤的工作提供幫助。材料

4、與方法1、主要試劑：嘣zol試劑，AccessRTPcRsystem，PLxsN、P職旦s2以及PcDNA等載體。限制性內(nèi)切酶，PCR試劑盒、PUcm—T載體、凝膠回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒。引物合成和測序服務(wù)由上海生工提供。2引物設(shè)計根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)，用引物設(shè)計軟件DNAstar設(shè)計Fas基因引物如下：上游：5’一CCGAGAArTCTGCAGArALTGCTGTGGAT一3：下游；5’GAGACTCGAGr門舊CAcTcCAG