Wnt信號通路在右半腸鋸齒狀息肉中的作用及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的:(1)研究Wnt信號通路在右半結(jié)腸鋸齒息肉發(fā)病機(jī)制中的可能作用;(2)探索右半結(jié)腸鋸齒狀息肉中Wnt信號通路的激活及調(diào)控機(jī)制。
　　方法:收集2011年1月至2012年11月瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)鏡中心行息肉切除術(shù)或內(nèi)鏡活檢的216例新鮮息肉組織，收集10例正常的結(jié)腸黏膜組織作為對照。HE染色后將上述組織分為右半結(jié)腸增生性息肉（right-sided hyperplastic polyp，RHP）、無蒂鋸齒狀腺瘤(sess

2、ile serrated adenoma，SSA)、右半結(jié)腸傳統(tǒng)腺瘤（right-sidedtraditional adenoma，RTA）、右半結(jié)腸癌(right-sided colorectal cancer，RCRC)、左半結(jié)腸增生性息肉（left-sided hyperplastic polyp，LHP）左半結(jié)腸傳統(tǒng)腺瘤(left-sided traditional adenoma，LTA)、左半結(jié)腸癌(left-sided c

3、olorectal cancer,LCRC)和正常結(jié)腸黏膜組織(normalcolonic tissue，NC)八組。其中右半結(jié)腸包括了升結(jié)腸、盲腸及橫結(jié)腸，左半結(jié)腸則包括降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸和直腸。(1)用免疫組化（SP法）和免疫熒光（間接法），檢測Wnt信號通路中的β-catenin、 APC和c-myc在不同結(jié)腸組織中的表達(dá)情況。(2)各組織提取DNA，PCR擴(kuò)增β-catenin第3外顯子和APC第15外顯子突變多發(fā)區(qū)的基因片段，將

4、擴(kuò)增的的片段直接測序，檢測突變情況。(3)將各組織的DNA進(jìn)行亞硫酸氫鹽修飾，根據(jù)針對APC的啟動(dòng)子區(qū)設(shè)計(jì)的引物（包括甲基化和非甲基化引物）進(jìn)行甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCRMSP)，PCR產(chǎn)物行凝膠電泳，判斷各標(biāo)本的甲基化情況。在右半結(jié)腸的 HP和SSA中各選5例進(jìn)行DNA亞硫酸氫鹽修飾后測序分析(bisulfite-sequencing analysis BSP)。PCR擴(kuò)增出APC啟動(dòng)子片段，

5、純化回收目的片段后連接至pGM-T載體上，轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞內(nèi)，培養(yǎng)后挑菌搖菌，提取質(zhì)粒，直接測序，對比原序列分析APC啟動(dòng)子各CpG位點(diǎn)的甲基化情況。
　　結(jié)果:(1) APC、β-catenin和c-myc蛋白的表達(dá)情況:β-catenin細(xì)胞核染率在RHP組為17.9％，在SSA組為28.6％，高于LHP組(3.3％，P＜0.05)。β-catenin細(xì)胞質(zhì)染率在RHP組為21.4％，在SSA組為33.3％，高于LHP組(13

6、.3％，P＜0.05)。APC表達(dá)量在RHP(72.2±17.0)、SSA(68.4±13.1)和LHP(53.7±26.5)三組高于TA（左:18.7±23.8;右:21.8±22.5）和CRC(左:31.4±21.5;右:34.4±19.7)組(P＜0.05)。c-myc評分在RHP(28.9±21.1)、SSA(35.7±17.5)和LHP(39.0±16.3)三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(P＞0.05)。而TA(左:76.9±16.0

7、;右:76.9±17.5)和CRC(左:78.0±16.9;右:80.3±16.4)的c-myc的表達(dá)量高于RHP(28.9±21.1)、SSA(35.7±17.5)和LHP(39.0±16.3)三組(P＜0.05)。(2)β-catenin第3外顯子和APC第15外顯子突變檢測:HP和SSA組未發(fā)現(xiàn)β-catenin的突變（分別為0/58、0/21），β-catenin在TA組的突變率為6.3％（右）和2.9％（左），在CRC組的突變

8、率為5.7％（右）和55.75（左）。APC在LCRC、LTA、RCRC以及RTA組突變率分別為65.7％、57.1％、60.0％和78.1％。此外，APC在RHP(67.9％)和SSA(57.1％)組的突變率高于LHP組(36.7％，P＜0.05)。(3) APC啟動(dòng)子甲基化檢測:通過MSP法，APC啟動(dòng)子在RHP(14.3％)和SSA(23.8％)組的甲基化率低于LHP(36.7％)和TA（左:37.1％;右34.3％）組（P＜0.

9、05）。BSP法證實(shí)RHP和SSA的APC啟動(dòng)子各CpG島呈低甲基化狀態(tài)。另外，APC突變和APC啟動(dòng)子的甲基化呈負(fù)相關(guān)（Spearman's R=-0.318，P＜0.01），APC的蛋白表達(dá)量與APC的甲基化呈負(fù)相關(guān)（Spearman'sR=-0.283，P＜0.01）。
　　結(jié)論:(1)右半結(jié)腸的鋸齒狀息肉中存在Wnt信號通路的激活。Wnt信號通路在右半結(jié)腸鋸齒狀癌變途徑中可能起著重要的作用。(2)右半結(jié)腸鋸齒狀息肉中Wnt