小麥品質性狀相關基因的分離及種子淀粉品質的遺傳改良.pdf

1、 小麥是世界性的重要糧食作物，在我國是僅次于水稻的第二大糧食作物，其產量與品質直接關系人類食物的供應程度和營養(yǎng)水平。 本文以授粉后12天的小麥種子為材料，構建cDNA文庫。從中隨機挑選10,000個克隆，利用Biomek 2000核酸工作站制成高密度cDNA陣列。然后分別以未受精子房、胚和胚乳中提取的RNA為模板，反轉錄合成探針與膜雜交，進行差異篩選。根據篩選結果，選取800個在胚、胚乳或胚和胚乳中表達的克隆進行表達序列標

2、簽(EST)分析，鑒定出216個不同的基因序列。其中與小麥品質性狀相關的基因有54個，這些基因將為品質改良提供重要的基礎資料。進而，為獲取低直鏈淀粉的轉基因小麥材料，通過上述cDNAmicroarray雜交技術篩選出一個克隆GBSSI；然后構建RNAi表達載體，通過農桿菌介導的方法轉化小麥，通過PCR，RT-PCR和葉片離體褪綠實驗鑒定出4株轉基因植株。對淀粉進行的碘試劑染色實驗和淀粉含量的測定結果表明GBSSI基因的RNA沉默使轉基因