抗豬輪狀病毒VP6單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、本研究用純化的重組PRVVP6蛋白作為免疫原，免疫8周齡BALB/c雌性小鼠，運用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，通過間接ELISA篩選，采用有限稀釋法，經(jīng)過4次克隆篩選，獲得了一株穩(wěn)定分泌抗PRVVP6的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名C5D10。經(jīng)鑒定C5D10為IgG1亞類，雜交瘤細(xì)胞的平均染色體數(shù)為93，細(xì)胞培養(yǎng)液上清及腹水效價分別為1：800和1：1×106，且C5D10單克隆抗體不與豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬偽狂犬病病毒發(fā)生

2、交叉反應(yīng)，顯示良好的特異性。 用抗PRVVP6蛋白單克隆抗體和PRV多克隆抗血清對感染PRV的Marc-145細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行了間接免疫熒光檢測病原的比較研究：McAb所進(jìn)行的間接免疫熒光染色后，PRV感染細(xì)胞培養(yǎng)物中多數(shù)細(xì)胞在其胞漿和細(xì)胞膜上出現(xiàn)綠色閃亮熒光，且熒光強度強，未接種病毒的細(xì)胞培養(yǎng)物未見有綠色閃亮熒光染色的細(xì)胞存在；利用PRV全病毒制備的抗血清對接種病毒和未接種病毒的細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行間接免疫熒光試驗表明，接種病毒的細(xì)胞