Tat蛋白對馬傳染性貧血病毒長末端重復(fù)序列啟動子活性的影響.pdf

1、馬傳染性貧血病毒(equineinfectiousanemiavirus，EIAV)屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，是馬傳染性貧血(equineinfectiousanemia，EIA，簡稱馬傳貧)的病原體。我國的馬傳貧驢白細胞弱毒疫苗，是迄今為止世界上唯一投入應(yīng)用的慢病毒疫苗，應(yīng)用該疫苗成功地控制了我國馬傳貧的流行，同時該疫苗也是研究慢病毒免疫預(yù)防非常有價值的模型。反轉(zhuǎn)錄病毒前病毒基因組長末端重復(fù)序列(LTR)對病毒復(fù)制有重要的調(diào)控作用，影

2、響到病毒的復(fù)制動力學(xué)、細胞嗜性、致病力等方面。 馬傳染性貧血病毒弱毒疫苗株在培育過程中LTR發(fā)生了兩處穩(wěn)定突變，分別是Tat反式激活區(qū)域(Tatactivatingregion，TAR)的起始堿基G到A和poly(A)附加位點C到A的突變。本研究將EIAV強毒力毒株、白細胞弱毒(EIAV-DLA)、驢胎皮膚細胞弱毒(EIAV-FDD)的LTR，以及TAR起始堿基、poly(A)附加位點突變的LTR分別克隆到pCAT3-basic

3、質(zhì)粒中，獲得位于報告基因氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)上游的不同LTR重組質(zhì)粒。同時將馬傳貧病毒反式激活蛋白Tat克隆于真核表達載體pCDNA3.1(+)，獲得了Tat蛋白的表達。將Tat表達質(zhì)粒分別與不同LTR克隆共轉(zhuǎn)染驢胎皮膚細胞，考察Tat對LTR啟動子活性的增強作用。研究發(fā)現(xiàn)，在皮膚細胞中Tat蛋白可以特異性增強來源于皮膚細胞弱毒疫苗LTR的啟動子活性，而對白細胞源性LTR無明顯增強作用。TAR起始位點和poly(A)的單堿基突變和