己烯雌酚人工抗原的研究.pdf

1、已烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)屬于人工合成的雌激素,在人和動(dòng)物體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生雌激素樣效應(yīng).在養(yǎng)殖業(yè)中,DES能夠顯著促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng),提高飼料轉(zhuǎn)化率,但由于DES對(duì)人體的致癌和致畸作用,世界各國(guó)均規(guī)定食品動(dòng)物養(yǎng)殖中不得以任何途徑和方式使用DES,動(dòng)物及動(dòng)物性食品中不得檢出DES.DES殘留免疫分析是DES殘留監(jiān)控中的重要手段之一.該研究屬于DES殘留免疫檢測(cè)試劑盒研制的前期工作內(nèi)容,也是必不可少的研究.研究取得如下結(jié)

2、果:1.在室溫條件下,將DES與丁二酸酐按一定比例溶解于無(wú)水吡啶中,攪拌反應(yīng)生成棕黃色物質(zhì),將其分離純化后對(duì)其進(jìn)行高分辨質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振碳譜及氫譜等鑒定,試驗(yàn)結(jié)果表明,該棕黃色物質(zhì)分子量為368,分子式為C22H2405,含有酚羥基、羧基等關(guān)鍵基團(tuán),為所要制備的DES衍生物已烯雌酚半琥珀酸(DES-HS).2.利用混合酸酐法將DES-HS與載體蛋白(BSA,OVA)進(jìn)行偶聯(lián)得到DES人工抗原.合成的人工抗原經(jīng)紫外掃描、SDS-P

3、AGE凝膠電泳鑒定證明DES-HS與載體蛋白偶聯(lián)成功;并用UVP Bioimaging system中的labworks 4.0 ImageAcquisition and Analysis software分析估算BSA與DES-HS的偶聯(lián)率為1:30~32.OVA與DES-HS的偶聯(lián)率為1:25~28.3.用合成的DES-HS-BSA結(jié)合物分別免疫家兔和Balb/c小鼠,采集免疫動(dòng)物血清.應(yīng)用瓊脂雙擴(kuò)散試驗(yàn)和間接ELISA試驗(yàn)、阻斷E

4、LISA檢測(cè)特異性DES抗體的產(chǎn)生,抗體效價(jià)及其與游離DES反應(yīng)的特異性.結(jié)果表明:無(wú)論免疫兔還是免疫小鼠,其免疫血清均能夠與DES-HS-OVA上的DES決定簇發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng);免疫兔血清效價(jià)不低于1:6000,免疫小鼠血清效價(jià)不低于1:12000;兔免疫血清能夠與游離DES發(fā)生特異性反應(yīng).通過(guò)上述研究和分析,可得出如下的結(jié)論:建立了DES-HS制備方法;成功地制備出了DES的人工抗原;用DES-HS-BSA分別免疫兔和小鼠制備出了