茯苓種質(zhì)資源評(píng)價(jià)及遺傳多樣性研究.pdf

1、茯苓(Wolfiporiacocos)屬于真菌界擔(dān)子菌門(mén)(Basidiomycota)，其菌核是一味重要的傳統(tǒng)中藥材。但長(zhǎng)期以來(lái)，茯苓的栽培菌株均依靠菌核組織分離的方法獲得，造成茯苓菌種質(zhì)量參差不齊;各茯苓產(chǎn)區(qū)之間相互引種頻繁，同物異名現(xiàn)象嚴(yán)重，給茯苓菌種質(zhì)量和栽培生產(chǎn)帶來(lái)了隱患。到目前為止，國(guó)內(nèi)對(duì)茯苓種質(zhì)資源及其遺傳多樣性尚未進(jìn)行系統(tǒng)的研究，給茯苓種質(zhì)資源利用和優(yōu)良菌株選育帶來(lái)了困難。
　　本論文對(duì)本實(shí)驗(yàn)室收集保藏的68個(gè)茯苓菌

2、株，進(jìn)行了菌落特征、生長(zhǎng)速度、胞外酶活性、菌核產(chǎn)量、菌核水溶性多糖和總?cè)坪康榷鄠€(gè)生物學(xué)性狀的考察，并基于SSR多態(tài)性對(duì)供試菌株的親緣關(guān)系進(jìn)行了研究。
　　供試茯苓菌株在CYM培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，菌絲密度、菌索發(fā)達(dá)程度、氣生菌絲發(fā)達(dá)程度存在差異。同一菌株在不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度存在差異，總體上，茯苓菌絲生長(zhǎng)速度是在麥粒培養(yǎng)基上＞在松木屑培養(yǎng)基上＞在CYM培養(yǎng)基上。供試菌株在CYM培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度介于0.74cm/d-1.39cm/

3、d之間;在麥粒培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度介于1.39cm/d-3.02cm/d之間;在松木屑培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度介于0.95cm/d-2.78cm/d之間。供試菌株長(zhǎng)滿(mǎn)菌袋所需的時(shí)間介于18.0d-26.5d之間。茯苓菌絲分泌到胞外的羧甲基纖維素酶的活性介于4.70μmol/mL·min-11.39μmol/mL·min之間，木聚糖酶活性介于0.96μmol/mL·min-2.91μmol/mL·min之間。2013年各供試菌株菌核平均單窖產(chǎn)量介

4、于0.47kg/窖-1.38kg/窖之間，其中有15個(gè)菌株的菌核產(chǎn)量高于目前的主栽菌株T1。供試菌株的菌核水溶性多糖含量介于3.07mg/g-6.61mg/g之間，總?cè)坪拷橛?.12mg/g-11.99mg/g之間。方差分析表明，這些生物學(xué)性狀均表現(xiàn)出顯著或極顯著差異。
　　茯苓部分生物學(xué)性狀之間顯示出顯著或極顯著的相關(guān)性。供試茯苓菌株的平均單窖產(chǎn)量與麥粒培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度呈顯著正相關(guān)，茯苓菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)菌袋所需時(shí)間與麥粒培養(yǎng)基上的

5、生長(zhǎng)速度、松木屑培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度、胞外木聚糖酶活性呈顯著或極顯著負(fù)相關(guān)。
　　根據(jù)茯苓基因組和轉(zhuǎn)錄組信息設(shè)計(jì)SSR引物，共篩選出多態(tài)性SSR引物44對(duì)。依據(jù)SSR多態(tài)性條帶對(duì)所有68個(gè)供試菌株進(jìn)行聚類(lèi)分析，其中56個(gè)菌株未顯示出差異。篩選出兩個(gè)特異性SSR標(biāo)記P105和S76，可分別將13號(hào)菌株和44號(hào)、45號(hào)菌株從群體中區(qū)分。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明，國(guó)內(nèi)茯苓種質(zhì)資源在生物學(xué)性狀上表現(xiàn)出較大差異，這為茯苓優(yōu)良菌株的選育提供了材