健康與患子宮內(nèi)膜炎水牛子宮內(nèi)細(xì)菌組成的比較分析.pdf

1、奶水牛子宮內(nèi)膜炎是奶水牛產(chǎn)后由病原微生物感染引起的一種常見繁殖疾病，常造成受胎率的下降和產(chǎn)犢間隔時(shí)期的延長，給奶水牛養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。細(xì)菌感染是引起奶水牛子宮內(nèi)膜炎的主要病原微生物之一，對于產(chǎn)后奶水牛子宮內(nèi)細(xì)菌組成的研究將為臨床上奶水牛子宮內(nèi)膜炎的防治提供相關(guān)的理論依據(jù)。本論文研究了產(chǎn)后14d健康和患子宮內(nèi)膜炎奶水牛子宮內(nèi)細(xì)菌組成的差異。首先通過實(shí)際操作對比研究了3種從奶水牛子宮內(nèi)采集粘液的方法;其次對比研究了三種從子宮沖洗液

2、中提取微生物總DNA的方法;最后分別建立了健康和患子宮內(nèi)膜炎水牛子宮內(nèi)細(xì)菌的克隆文庫，并對子宮內(nèi)的細(xì)菌進(jìn)行了序列比對和系統(tǒng)發(fā)育分析。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.使用子宮沖洗槍配套噴壺的采樣方法適合采集水牛子宮內(nèi)的粘液，該方法操作簡單、對器械要求較低并且采集的樣品具有代表性。
　　 2.使用QIAamp DNA stool mini kit和Bead beating結(jié)合的方法適合提取子宮沖洗液中微生物總DNA，該方法的DNA

3、濃度可達(dá)1000ng/ul，純度高，并且片段完整性較好，通過PCR檢測，所提取的DNA適合進(jìn)一步的分子生物學(xué)研究。
　　 3.產(chǎn)后14天水牛子宮內(nèi)的細(xì)菌主要屬于梭桿菌門（Fusobacteria），厚壁菌門（Firmicutes），擬桿菌門（Bacteroidetes），放線菌門(Actinobacteria)和變形菌門（Proteobacteria）?；甲訉m內(nèi)膜炎組（M組）中有38.89％克隆的屬于梭桿菌門（Fusobaete

4、ria），序列比對分析表明，這些序列和Fusobacterium necrophorum subsp有最高的的相似度(99％)。另外46.67％的克隆屬于擬桿菌門（Bacteroidetes），其中Bacteroides heparinolyticus和Porphyromonas levii在這個門中所占比例最大，分別為55.95％和42.86％，屬于厚壁菌門(Firmicutes)和變形菌門（Proteobacteri）的克隆較少，所

5、占比例分別為7.22％和6.67％，但是這兩個門中的細(xì)菌種類相對豐富。僅僅只有0.56％屬于放線菌門（Aetinobaeteria）。健康組（H組）中，26.56％的克隆屬于梭桿菌門（Fusobacteria），并且和Fusobacterium necrophorum subsp的相似度最高(99％)，32.81％的克隆屬于Firmicutes，這些克隆中的61.9％與Clostridium cadaveris的相似性最高（≧97％），

6、35.94％的克隆屬于Bacteroidetes，其中56.52％的序列與Bacteroides heparinolyticus相似性最高(99％)?？寺≈袑儆赑roteobacteria(4.69％)的比例較低。結(jié)果表明Fusobacterium necrophorum subsp、Bacteroidesheparinolyticus和Porphyromonas levii可能是引起水牛產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌，厚壁菌門細(xì)菌Clos