番茄黃化曲葉病毒的分子鑒定、遺傳多樣性分析及其誘導抗性相關基因的分離.pdf

1、番茄（Solanum lycopersicum Mill.）由于其營養(yǎng)豐富，口味獨特，已成為世界性的蔬菜作物之一。隨著番茄栽培面積的增加，諸多不利因素（如生物脅迫和非生物脅迫）制約了番茄產業(yè)的發(fā)展。其中番茄黃化曲葉病毒病(Tomato Yellow Leaf Curl VirusDisease，TYLCD)是番茄生產上最嚴重的病害之一。為了更有效地分析其致病機理，本研究克隆浙江省番茄黃化曲葉病毒(Tomato Yellow Leaf C

2、url Virus，TYLCV)分離物的全長序列，分析其結構特征，序列同源性及系統(tǒng)發(fā)育關系;為了進一步分析其遺傳多樣性，我們從NCBI網站上檢索TYLCV，分析來源于29個國家48個地區(qū)TYLCV的基因結構、GC含量、保守性比對及其遺傳變異;此外，利用熒光定量PCR(qRT-PCR)技術檢測抗感番茄接種前后病毒含量的差異，討論與其抗性程度的相關性;最后，利用cDNA-AFLP技術分離了TYLCV誘導抗病相關基因。研究結果如下:
　

3、　 1.TYLCV的分子鑒定及序列分析
　　 運用PCR技術克隆并鑒定了浙江省杭州地區(qū)TYLCV分離物，病毒基因全長為2781個核苷酸，共編碼6個開放閱讀框（AV1、AV2、AC3、AC2、AC1、AC4），即為TYLCV的典型結構;核苷酸序列比對分析發(fā)現(xiàn)該病毒分離物與美國的TYLCV同源性最高(99.6％);6個編碼區(qū)分析顯示除云南外，AV2與國內其他地區(qū)同源性均高達100％;系統(tǒng)發(fā)育關系分析表明病毒分離物與江蘇、北京、美國

4、、墨西哥的TYLCV劃分為一類，親緣關系最近。
　　 2.TYLCV的遺傳多樣性分析
　　 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)上共檢索到48個TYLCV; GC含量分析表明沒有較大差異，隨著核苷酸長度的變化趨勢較一致;序列比對表明這些TYLCV的保守性很高;系統(tǒng)發(fā)育關系分析這些TYLCV被分為10類;同源性分析顯示，序列間差異較大，序列間同源性最低為72.8％，最高為98.6％。
　　

5、 3.TYLCV的定量分析
　　 利用qRT-PCR技術對抗、感番茄材料在接種后不同時期病毒含量進行分析，結果表明:接種后同一時期抗病材料的病毒含量總體低于感病材料;除TY-1+2+3+5番茄材料，其它抗病番茄材料的病毒含量隨著時間的增長均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢;番茄材料的病毒含量與抗性呈現(xiàn)一致性。
　　 4.運用cDNA-AFLP技術分離番茄抗TYLCV的差異表達基因
　　 利用cDNA-AFLP技術分離抗病

6、番茄在接種后不同時期的差異表達基因，結果表明:共篩選出287條轉錄差異片段，其中156條上調表達，131條下調表達;對其中15個轉錄表達片段（Transcript-derived fragment，TDF）進行序列分析，11個TDF與NCBI已有序列同源，功能涉及代謝、信號傳導、轉錄調控、DNA結合以及逆境誘導蛋白，另有4個TDF無同源序列或同源性低，預測是一些未知功能基因。
　　 總之，這些結果一方面為今后揭示TYLCV的致病