雞傳染性法氏囊病毒核酸檢測標準物質(zhì)的研制.pdf

1、雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是一種急性、高度接觸性傳染病，由雞傳染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease，IBDV)引起的。該病毒主要侵害雛雞的淋巴組織，法氏囊最為嚴重，導致淋巴細胞受到損壞，降低或不能產(chǎn)生免疫球蛋白，從而出現(xiàn)免疫機能缺陷。這種病毒導致馬立克氏病、新城疫等疫苗接種的免疫失敗，出現(xiàn)發(fā)病率和死亡率急劇上升。因此，快速的診斷和檢測雞傳染性法氏囊病毒對該

2、病的防控意義重大。然而在檢測雞傳染性法氏囊病毒時缺乏統(tǒng)一標準物質(zhì)，這給病毒的定性和定量檢測帶來很多問題。因此研制雞傳染性法氏囊病毒核酸檢測標準物質(zhì)對于提高檢測的準確度、保障動物產(chǎn)品質(zhì)量安全具有重要意義。
　　本研究采用滅活后的病毒液制備雞傳染性法氏囊病毒核酸檢測標準物質(zhì)。將純化后的病毒進行無菌檢驗、外源性病毒檢驗，試驗結(jié)果顯示不含AIV、NDV、ALV、GPV、REV、EDSV等外源性病毒。對IBDV進行滅活并初步定量，將凍干保護

3、劑與雞傳染性法氏囊病毒液混勻后，進行分裝，所得樣品采取凍干處理。
　　本研究建立了雞傳染性法氏囊病毒核酸的實時熒光定量RT-PCR方法，并采用該方法檢測雞傳染性法氏囊病毒核酸標準物的均勻性、穩(wěn)定性。同時外部實驗室對該標準物質(zhì)進行協(xié)作標定，對定值數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析處理，確保置信范圍的準確性。將均勻性試驗的檢測數(shù)據(jù)進行方差分析，結(jié)果顯示組內(nèi)與組間無差異(P＞0.05)。穩(wěn)定性試驗表明37℃存放7天、室溫(25℃)21天、4℃4個月以及-

4、20℃存放1年無明顯變化。將均勻性、穩(wěn)定性以及協(xié)作標定測定的不確定度引入定值結(jié)果中，在置信率為95％時，該標準物質(zhì)的定值結(jié)果為（2.32±0.67）×105copies/μL。
　　綜上所述，本試驗制備了雞傳染性法氏囊病毒核酸檢測標準物，建立了雞傳染性法氏囊病毒核酸的實時熒光定量RT-PCR方法。雞傳染性法氏囊病毒核酸檢測標準物具有較好的均勻性、穩(wěn)定性，其定值結(jié)果為（2.32±0.67）×105copies/μL，并可用來評價實驗