玉米WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及耐逆性研究.pdf

1、WRKY轉(zhuǎn)錄因子主要存在于植物中，其家族成員廣泛參與植物生長發(fā)育、代謝以及對生物和非生物脅迫的反應(yīng)。本研究利用逆境因子Zm WRKY33,Zm WRKY57和Zm WRKY62基因進行脅迫誘導(dǎo)，在此基礎(chǔ)上從玉米中克隆這三個WRKY基因,并對其耐逆性功能進行了初步的研究。結(jié)果如下：
　　 1.利用逆境因子干旱、高鹽和低溫對ZmWRKY33，ZmWRKY57和ZmWRKY62三個基因進行誘導(dǎo)表達分析，結(jié)果顯示三個基因均受逆境因子干旱

2、、高鹽和低溫的誘導(dǎo)表達。
　　 2.克隆了三個玉米WRKY基因，Zm WRKY33，Zm WRKY57和Zm WRKY62。它們分別編碼307個氨基酸殘基、311個氨基酸殘基和306個氨基酸殘基，都有1個高度保守的WRKY結(jié)構(gòu)域，鋅指結(jié)構(gòu)域都為典型的C2H2。
　　 3.構(gòu)建了過表達載體（p-Zm WRKY33）,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化晚晴粳稻愈傷，獲得20 株T0代過表達株系。T1代過表達株系的耐逆性功能研究表明，Z

3、m WRKY33具有增強水稻耐干旱、高鹽和低溫的耐受性。
　　 4.通過構(gòu)建融合表達載體PRTL-2-Zm WRKY33-mGFP，PRTL2-Zm WRKY57-mGFP和PRTL2-Zm WRKY62-mGFP,采用基因槍法轟擊洋蔥表皮細胞進行亞細胞定位分析，結(jié)果顯示Zm WRKY33,Zm WRKY57和Zm WRKY62與GFP載體的融合蛋白都定位于細胞核中，說明Zm WRKY33，Zm WRKY57和Zm WRKY62