雞腿菇菌種質(zhì)量檢測技術(shù)研究.pdf

1、食用菌菌種是食用菌生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的源頭性生產(chǎn)資料,食用菌菌種質(zhì)量的好壞直接影響食用菌生產(chǎn)管理過程以及產(chǎn)品質(zhì)量與產(chǎn)量,關(guān)系著食用菌產(chǎn)業(yè)能否得到良好的發(fā)展環(huán)境問題。本研究以Co.0001、Co.0003、Co.0004和Co.0058這四株雞腿菇為材料,從其菌種活力、菌種純度和菌種種性三個大的方面展開研究,最后建立了一套比較完整的雞腿菇菌種質(zhì)量檢測技術(shù)。本文主要研究內(nèi)容如下:
　　 1.菌種種性
　　 以4株雞腿菇菌種、3株金針

2、菇菌種和2株草菇菌種為材料,分別提取其DNA并進(jìn)行ITS-PCR擴(kuò)增,根據(jù)ITS片段大小可以將雞腿菇與金針菇區(qū)分開來,而不能將雞腿菇與草菇區(qū)分開,為此,又對雞腿菇和草菇菌種進(jìn)行ITS-RFLP分析,結(jié)果表明雞腿菇菌種種內(nèi)的ITS序列保守性極強(qiáng),ITS-RFLP不能達(dá)到鑒別雞腿菇種內(nèi)個體水平的目的,但能將種與種之間的菌種鑒別開。通過對NCBI上確定的雞腿菇序列進(jìn)行DNAMAN分析,并結(jié)合本實(shí)驗室已研究過的其它29個種屬菌種的ITS片段大小

3、及4種相關(guān)限制性內(nèi)切酶的酶切圖譜,可以將雞腿菇菌種與其它29個種屬菌種區(qū)分開。通過ITS-RFLP分析可以實(shí)現(xiàn)雞腿菇在種水平上的鑒定。
　　 在種的水平上確定為雞腿菇后還需對種內(nèi)個體進(jìn)行鑒定,本試驗對雞腿菇種內(nèi)的4個不同的個體進(jìn)行IGS分析,結(jié)果表明,4株雞腿菇IGS1-RFLP的酶切圖譜完全一致,IGS1-RFLP不能將雞腿菇種內(nèi)個體鑒別開;4株雞腿菇的IGS2片段大小的呈現(xiàn)多態(tài)性,IGS2-PCR能將菌種Co.0001與其它

4、三種雞腿菇區(qū)分開來。本試驗以Co.0058菌株為例,將同一Co.0058母種轉(zhuǎn)接為2個Co.0058菌種,一個作為標(biāo)準(zhǔn)菌種,另一個作為待檢菌種,以Co.0001作為對照菌株,對這三個菌種進(jìn)行IGS2、RAPD和SRAP三種分子標(biāo)記擴(kuò)增,結(jié)果從60個RAPD和80對SRAP隨機(jī)引物中分別篩選出9個和8對特異性引物,加上1對IGS2引物共18種引物組合中,標(biāo)準(zhǔn)菌種和待檢菌種的指紋圖譜完全一致,且與對照菌株相比能擴(kuò)增出25條穩(wěn)定性好,重復(fù)性高

5、的特異性條帶,即能證明待檢菌株是Co.0058。因此,在對待檢菌種進(jìn)行品種鑒定時,不論利用IGS、RAPD、ISSR、SRAP四種技術(shù)中的那幾種技術(shù),只要待檢菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株的擴(kuò)增圖譜相同,且與對照菌株相比能得到足夠多的特異性片段,即可以在雞腿菇種內(nèi)個體水平上對其進(jìn)行鑒別。
　　 2.菌種純度
　　 以正常無污染的雞腿菇菌種為材料,分別接種不同濃度的大腸桿菌,使之形成隱性污染。采用4種方法對隱性污染菌種進(jìn)行檢測,結(jié)果表明:

6、4種方法均能檢測出細(xì)菌的存在;其中,液體搖瓶法的檢測靈敏度最高,達(dá)到的檢測極限為103個細(xì)菌/克菌絲,涂平板法能檢測到104個細(xì)菌/克菌絲,平板劃線法和煮沸PCR法的檢測極限最低,為105個細(xì)菌/克菌絲。
　　 人為地向正常原種中混入不同濃度的霉菌孢子,利用PDA培養(yǎng)法進(jìn)行檢測,可以檢測到每克菌絲混有67個木霉孢子的水平。
　　 對三種雞腿菇菌種提取dsRNA,并對其提取物進(jìn)行DnaseⅠ和RNaseA酶解,可以檢測菌種

7、內(nèi)dsRNA的存在情況,本次實(shí)驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)Co.0003、Co.0004和Co.0058三種雞腿菇均不存在dsRNA病毒。
　　 3.菌種活力
　　 以三個雞腿菇菌種不同菌齡的菌絲為材料,測定了菌種老化過程中的生物學(xué)指標(biāo)和生理生化指標(biāo),分析結(jié)果表明,三種雞腿菇菌種隨著菌齡增加,其菌絲長勢和耐高溫能力都有不同程度的減弱。六種酶活測定中,纖維素酶、多酚氧化酶和蛋白酶與菌齡都存在極顯著相關(guān),其中,多酚氧化酶與菌齡存在極顯著正相關(guān)