蘭州百合病毒病害調(diào)查研究及LSV，CMV衣殼蛋白表達(dá)純化.pdf

1、蘭州百合(Lilium davidii var.unicolor)屬川百合(Lilium davidii Duchautre)變種，是多年生草本植物，是一種球莖可食的經(jīng)濟(jì)作物，主要分布在蘭州市南郊西果園鄉(xiāng)一帶，在當(dāng)?shù)卣加兄匾慕?jīng)濟(jì)地位。 近年來地產(chǎn)蘭州百合質(zhì)量波動(dòng)較大，多見于百合球莖外觀變小、口感變差的情況。誘發(fā)因素除田間管理不到位等人為因素外，百合病毒病害感染導(dǎo)致百合植株退化是一個(gè)不可忽視的重要因素。 蘭州百合的病毒病

2、害流行狀況尚無系統(tǒng)報(bào)道，本文闡述了蘭州百合的病毒感染情況，采用了分子生物學(xué)及免疫學(xué)等多種手段檢測了蘭州百合病毒感染狀況，并對(duì)染病植物做了初步的病理分析。 研究中發(fā)現(xiàn)公開報(bào)道侵染的常見植物病毒：百合無癥病毒(Lily symptomless virus，LSV)、黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)和百合卷曲病毒(Lily mottle virus，LMoV)對(duì)蘭州百合都有侵染，其中LSV和CMV的感

3、染率達(dá)到100％。 本研究以蘭州百合感染葉片為病毒分離材料，運(yùn)用基于兩種凝膠過濾層析法和密度蔗糖梯度超離心法的LSV和CMV分離純化方法，獲得了純化的完整LSV病毒顆粒。 繼而對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行了變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，確定了其衣殼蛋白分子量大小，并對(duì)衣殼蛋白進(jìn)行了MALDI-Tof質(zhì)譜分析，從多個(gè)方面證實(shí)了分離物確系LSV。 隨后通過反轉(zhuǎn)錄PCR方法，克隆了并測序了該LSV和CMV百合株衣殼蛋白基因序列，并在大

4、腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)了兩種重組衣殼蛋白。 通過在NCBI對(duì)LSV及CMV百合株病毒衣殼蛋白序列的核酸、氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，分析了蘭州百合感染LSV和CMV與世界其他地區(qū)發(fā)現(xiàn)的LSV及CMV之間的進(jìn)化關(guān)系，建立了兩種蛋白的進(jìn)化樹。 本研究是對(duì)蘭州百合病毒病害的初步研究，主要分離純化了受到感染的相關(guān)病毒，為下一步利用純化LSV全病毒多抗作為包被抗體，抗LSV重組衣殼蛋白多抗作為酶標(biāo)檢測抗體的雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫檢測方法提供了基礎(chǔ)