家蠶葡萄糖氧化酶基因BmGox的克隆和表達(dá)以及序列分析.pdf

1、葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase，GOX)是一種需氧脫氫酶，對生物體無毒，無副作用，能利用葡萄糖氧化成葡萄糖酸而有效除氧。其在動物、植物以及微生物中廣泛存在。與真菌GOX相比，有關(guān)昆蟲GOX性質(zhì)和功能的研究，顯得非常有限。近期研究發(fā)現(xiàn)還發(fā)現(xiàn)GOX在昆蟲與植物相互關(guān)系中起著至關(guān)重要的作用。
　　 本文主要通過家蠶全基因組序列、基因芯片、EST數(shù)據(jù)，對家蠶編碼葡萄糖氧化酶GOX的兩個候選基因Bmgox63和.Bmgox7

2、2進行了克隆和原核表達(dá)。
　　 獲得了以下的結(jié)果：
　　 (1)克隆出了家蠶的GOX基因的兩個基因，并進行了序列分析。
　　 通過基因序列分析和氨基酸預(yù)測，我們得到Bmgox63基因ORF全長1，710bp，編碼566個氨基酸，預(yù)測蛋白的分子量大小為63kDa，等電點為5.99。Bmgox72基因ORF全長1，830bp，編碼606個氨基酸，預(yù)測蛋白的分子量大小為65kDa，等電點為5.44。它們位于家蠶的第16

3、號染色體上的nscaf3058。
　　 (2)原核表達(dá)了這兩個基因獲得了大量的蛋白，并正確制備了這兩個基因的抗體。
　　 將兩個基因編碼區(qū)亞克隆到pET-28a(+)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化到BL21表達(dá)菌株，誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，并純化蛋白。以純化的蛋白制備抗體，Western blotting檢測到了表達(dá)的蛋白，證明抗體制備是正確的。
　　 (3)研究了Bmgox63和Bmgox72這兩個基因在家蠶各個組織和時期的表達(dá)情況。<

4、br>　　 通過基因水平的表達(dá)譜，Bmgox63其總體的表達(dá)量偏低，幾乎不表達(dá)。Bmgox72基因在家蠶的各個組織和時期中均有或強或弱的表達(dá)。其中在時期表達(dá)譜中，五齡三天以后的表達(dá)量明顯升高。組織表達(dá)譜發(fā)現(xiàn)Bmgox72基因在各個組織中都可以檢測得到微量的表達(dá)。而在雄性絲腺和雌性絲腺的表達(dá)量則明顯高于其他組織。通過制備的抗體，從蛋白水平中檢測到了這兩種基因的表達(dá)情況。在蛋白水平上，Bmgox63在家蠶各個組織蛋白中都沒有表達(dá)；而Bmg