食油假單胞菌DT4降解四氫呋喃的分子機制研究.pdf

1、四氫呋喃（tetrahydrofuran，THF）是一種重要的有機合成原料和性能優(yōu)良的溶劑，隨著其在工業(yè)生產(chǎn)中的大量使用和排放，對生態(tài)環(huán)境和人類健康帶來了極大的危害和影響。因此，采用高效經(jīng)濟、綠色環(huán)保的生物法降解THF，意義重大。本論文以THF降解菌DT4為研究對象，從基因水平研究DT4對THF的降解機制，為THF生物降解的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　利用消除質(zhì)粒的菌株DT4，分析菌株DT4的質(zhì)粒對THF降解的調(diào)控作用以及抗生素

2、抗性。菌株DT4質(zhì)粒消除的最佳方法為:以40℃-SDS法處理菌體，并連續(xù)傳代5次。結(jié)果表明，質(zhì)粒消除后的DT4對THF的降解能力有所下降，氯霉素(Cm)和四環(huán)霉素(Ter)抗性消失，說明菌株DT4的質(zhì)粒上含有THF降解相關(guān)基因，并含有Cm、Ter抗性基因。
　　采用Illumina HiSeq2000高通量測序平臺對菌株DT4進行全基因組測序，結(jié)果顯示其基因組大小為4.6Mb，GC含量為62.30％。生物信息學分析表明，菌株DT4

3、含有4317個ORF、62個tRNA和49個sRNA。通過RAST、COG、GO、KEGG等公共數(shù)據(jù)庫，分析注釋了菌株DT4的基因信息和功能。
　　通過轉(zhuǎn)座子誘變的方法研究了DT4降解THF的相關(guān)基因。轉(zhuǎn)座子pSC123誘變DT4的最適條件為:比例為1∶1，接合時間24h，涂布后30℃培養(yǎng)3d，突變率可達0.416％。反復篩選后共獲得137株突變株。選擇其中一株進行后續(xù)研究，命名為Mut12。利用SEFA-PCR的方法克隆得到50