2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)是紅茶品質形成的關鍵因素,為此本課題選用PPO活性較高的“云大”鳳慶種鮮葉為材料,經(jīng)提取、分離純化,得到兩條PPO同工酶,并分別做了較全面的酶學特性研究。具體結果如下:
  (1)依據(jù)酶活力、Native-PAGE電泳圖等,優(yōu)化確定鳳慶PPO最佳提取條件:取適量茶鮮葉,以料液比1∶3(W/V)加入4℃預冷的檸檬酸鹽緩沖液(0.1 mol/L,pH7.2),和5%(g/mL)

2、 PVP冰浴研磨,漿液4℃浸提12h,9000 r/min,4℃離心30 min,取上清,得PPO粗酶液。
  (2)制備的鳳慶PPO粗酶液,經(jīng)硫酸銨分級沉淀、離子交換層析(DEAE-SepharoseCL-6B)和凝膠過濾層析(Sephadex G-150),分離純化得到2條同工酶:PPOⅠ,約35 kDa的單一蛋白亞基,純化倍數(shù)19.45; PPOⅡ,55-66.2 kDa的兩個蛋白亞基結合體,純化倍數(shù)30.18。
  

3、(3) PPO同工酶性質分析(以鄰苯二酚為底物):PPOⅠ和Ⅱ的最適反應溫度均為40℃,最適pH分別為5.2、5.6,最適Cu2+濃度分別為0.5×10-7mol/L和1.00×10-7mol/L。抑制劑對鳳慶PPOⅠ和Ⅱ的作用強弱次序:抗壞血酸>亞硫酸鈉>EDTA>半胱氨酸,抗壞血酸最高濃度時,酶活下降50%。鳳慶PPO最適底物是鄰苯二酚和焦沒食子酸,可部分氧化沒食子酸、對苯二酚,對間苯二酚作用最弱。酶動力學參數(shù):以鄰苯二酚為底物,P

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