高壓電暈電場誘變納豆芽孢桿菌合成γ-聚谷氨酸產(chǎn)量提高的研究.pdf

1、為了提高納豆芽孢桿菌產(chǎn)γ-聚谷氨酸能力，本試驗采用針板高壓電暈電場和稀土元素來處理納豆芽孢桿菌N-0，處理結(jié)果顯示:3 kV-30 min-0.8 cm的針板處理電場，可篩選到γ-PGA產(chǎn)量為21.2g·L-1的菌株N-E5.2，是菌株N-0γ-PGA產(chǎn)量的8倍;稀土元素二次處理，篩選出γ-PGA產(chǎn)量為22.8g·L-1的N-E5.2b，產(chǎn)量又提高了7.5％，且連續(xù)7次傳代，發(fā)酵性能穩(wěn)定。
　　以納豆芽孢桿菌N-E5.2b為研究對

2、象，進(jìn)行培養(yǎng)基響應(yīng)面優(yōu)化研究構(gòu)建響應(yīng)方程。獲得的優(yōu)化培養(yǎng)基(g·L-1):細(xì)菌學(xué)蛋白胨15、蔗糖46.38、谷氨酸鈉45.85、酵母提取粉2.5、NaCl5、MgSO4·7H2O0.5、MnSO4·4H2O0.4、CaCl20.25、K2HPO4·3H2O5.2和KH2PO42。搖瓶發(fā)酵γ-PGA產(chǎn)量達(dá)38.94 g·L-1，較優(yōu)化前提高了70.8％。
　　提取和擴(kuò)增6株不同處理菌株的pgsBCA合成酶基因，對比這6株菌的pgsB

3、、pgsC和pgsA的基因序列及合成酶蛋白PgsB、PgsC和PgsA的氨基酸序列差異。結(jié)果顯示:pgsB、pgsC和pgsA基因分別約含1170個、450個和1140個核苷酸，分別編碼約390個、150個和380個氨基酸。高壓電暈電場和稀土元素促使pgsBCA基因序列發(fā)生了堿基的置換和顛換、插入和缺失，合成酶PgsBCA氨基酸序列出現(xiàn)多處氨基酸間的替換、插入和缺失，且對序列的開端和尾端影響較大，PgsA在30～40個氨基酸區(qū)間變化顯著