2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩69頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、木聚糖是半纖維素的主要組份,其主鏈由β-D-木糖單元通過β-1,4糖苷鍵連接而成。木聚糖帶有不同類型的取代基,例如,阿拉伯糖、葡聚糖等,完全降解木聚糖需要多種水解酶共同參與。木聚糖酶是可降解木聚糖的酶系,其中,β-D-1,4內切木聚糖酶及β-D木糖苷酶是最為重要的酶系成員。近十年來,木聚糖酶在飼料、食品、造紙等工業(yè)領域中顯示了廣闊的應用前景,現(xiàn)已成為國內外酶工程研究的熱點。目前,研究者從不同微生物中克隆出多種木聚糖酶基因,并選擇合適的宿

2、主進行了表達。本研究以黑曲霉C71(A.nigerC71)為出發(fā)菌株,克隆了β-D-1,4內切木聚糖酶,即xynB,并在大腸桿菌中得到表達,構建了木聚糖酶基因工程菌G81,通過旋轉正交實驗,探討了發(fā)酵條件對G81產酶的影響,并對重組酶酶學性質進行了研究。主要研究成果如下:
   參考GenBank報道的黑曲霉xynB基因序列,設計了兩條特異性引物,從A.nigerC71中克隆了xynB基因。DNA序列分析表明,該基因開放閱讀框(

3、ORF)為678bp,可編碼225個氨基酸,理論分子量為24.127kDa,等電點為5.23。同源性分析顯示,編碼的225個氨基酸序列與來源于寧佐美曲霉(A.usamii)xyn的氨基酸序列同源性高達97%,與來源于玉米圓斑病菌(C.carbonum)xyn的氨基酸序列同源性為60%。利用SWISS-MODEL和ESyPred3DWebServer1.0對xynB氨基酸序列進行了序列分析及同源建模,目的蛋白與模板的三維結構模型比較發(fā)現(xiàn),

4、兩個模型具有數(shù)目相同的二級結構:15個β折疊股和1個a螺旋,且空間結構相互對應。其中,前者的β折疊(由Thr168-Arg176組成)比后者的β折疊(由Phe133-Ser138組成)多3個氨基酸。
   選用pET32a(+)作為表達載體,設計限制性酶切位點KpnI和EcoRI;將xynB基因克隆至pET32a(+)上,經篩選獲得陽性重組子pET-XYNB;將陽性重組子轉化至E.coliBL21中,即基因工程菌G81。搖瓶發(fā)酵

5、液具有較高的木聚糖酶活力,經SDS-PAGE電泳分析,蛋白圖譜顯示1條大約為30kDa的特異性條帶。
   選用發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間和誘導物濃度三個因素設計了正交旋轉組合試驗,構建發(fā)酵條件對G81產木聚糖酶影響的數(shù)學模型:Y=234.38+113.70X1+24.76X2+0.01X3+30.55X1X2-2.52X1X3-2.99X2X3+49.34X12-42.02X22-42.85X32。結果顯示,G81搖瓶發(fā)酵的最佳條件組

6、合為:發(fā)酵溫度28.6℃,誘導物濃度0.8mmol/L,培養(yǎng)時間15h,其中發(fā)酵溫度對G81產酶影響最為顯著,為主效因子。10L發(fā)酵罐中進行G81擴大培養(yǎng),結果表明,G81在10L發(fā)酵罐中最佳發(fā)酵時間為8h:添加誘導物IPTG后6h內,木聚糖酶活力上升緩慢,從6h開始,酶活力上升迅速,到8h達到86100.21U,之后酶活力下降,12h后酶活力降到最低。
   酶學性質研究表明,G81木聚糖酶于40℃條件下較穩(wěn)定,40℃保溫1h

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論