L-羥脯氨酸寡肽的合成、分離及其與DNA的相互作用.pdf

1、本文以電噴霧質(zhì)譜為檢測(cè)手段，研究了反應(yīng)時(shí)間、溫度、溶劑等對(duì)L一羥脯氨酸在三氯氧磷輔助下的成肽反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，肽鏈長(zhǎng)度并無(wú)明顯變化，仍以二肽為主，且反應(yīng)2 h以后產(chǎn)物中二肽相對(duì)豐度又有所減少；極性較大的乙腈、四氫呋喃溶劑更利于成肽反應(yīng)；反應(yīng)溫度以20℃為宜，溫度升高不利于成肽反應(yīng)。利用ESI-MS/MS研究了L-羥脯氨酸寡肽正離子的質(zhì)譜裂解規(guī)律，發(fā)現(xiàn)羥脯氨酸寡肽比較容易先脫去一分子氨基酸殘基，再失去一分子水或一氧化

2、碳，或者直接失去一分子羥脯氨酸，符合多肽b型斷裂的典型特征。 建立了采用高效液相色譜及質(zhì)譜技術(shù)分離鑒定羥脯氨酸寡肽混合物的方法，優(yōu)化了羥脯氨酸寡肽混合物的反相液相色譜分離條件。實(shí)驗(yàn)采用YWG C8(10 μm，10 mmx250mm)為分離柱，以乙腈-0.06％TFA水溶液(體積比為2:98)為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫分離，在電噴霧電離正離子模式下對(duì)幾種洗脫物進(jìn)行了ESI-MS及ESI-MS/MS鑒定。結(jié)果顯示，分離出的各組分分別對(duì)應(yīng)

3、為羥脯氨酸二肽、羥脯氨酸環(huán)二肽和羥脯氨酸三肽。實(shí)驗(yàn)利用IR，<'1>HNMR，<'13>CNMR對(duì)羥脯氨酸環(huán)二肽結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。 利用紫外吸收光譜初步研究了時(shí)間、溫度、羥脯氨酸環(huán)二肽濃度、pH值、離子強(qiáng)度等因素對(duì)羥脯氨酸環(huán)二肽與DNA相互作用的影響。結(jié)果表明：當(dāng)羥脯氨酸環(huán)二肽與CT-DNA相互作用后，體系的紫外光譜呈減色效應(yīng)，推測(cè)可能存在羥脯氨酸環(huán)二肽與DNA磷酸基團(tuán)的作用。37℃下CT-DNA與羥脯氨酸環(huán)二肽的結(jié)合反應(yīng)很快完成