天花粉蛋白抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　目前我國(guó)胃癌的發(fā)病率以及死亡率均居高不下。中藥瓜蔞的塊根含天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)，具有潛在的抗腫瘤作用。本文通過(guò)研究天花粉蛋白對(duì)人胃癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用，以期發(fā)現(xiàn)通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)抑制胃癌的新型中成藥。同時(shí)，我們將在細(xì)胞內(nèi)研究天花粉蛋白賴(lài)氨酸(K)173/精氨酸(R)174和賴(lài)氨酸(K)177的突變體對(duì)核糖體蛋白合成功能的抑制作用，進(jìn)一步探討天花粉蛋白抗腫瘤的分子機(jī)制。
　　研究方法:<

2、br>　　取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的胃癌SGC7901細(xì)胞，用不同濃度的天花粉蛋白處理后，分別從細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞生長(zhǎng)增殖兩方面來(lái)檢測(cè)天花粉蛋白對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定天花粉蛋白對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞周期及凋亡的作用。應(yīng)用Westernblotting觀察胃癌SGC7901細(xì)胞caspase-9、caspase-3; PARP; pERK; ERK的變化。同時(shí)，通過(guò)定點(diǎn)突變、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增、提取、測(cè)序、轉(zhuǎn)染等方法構(gòu)建天

3、花粉蛋白K173A/R174A和K177A的突變體，最后通過(guò)測(cè)定熒光素酶活性，對(duì)比野生型天花粉蛋白及突變K173A/R174A和K177A后的天花粉蛋白對(duì)核糖體蛋白合成的抑制作用。
　　研究結(jié)果:
　　(1)天花粉蛋白處理后的胃癌SGC7901細(xì)胞出現(xiàn)了皺縮、變形，對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。(2)天花粉蛋白可以將胃癌SGC7901細(xì)胞阻滯于S期。(3)天花粉蛋白誘導(dǎo)胃癌SGC7901細(xì)胞發(fā)生凋亡，并且細(xì)

4、胞凋亡呈現(xiàn)出濃度依賴(lài)性。(4) Western blotting法檢測(cè)結(jié)果顯示:caspase-9，caspase-3，PARP表達(dá)降低，呈濃度依賴(lài)性。并且隨著天花粉蛋白濃度的升高，ERK表達(dá)降低，天花粉蛋白處理(7.0和14μM)激活ERK，磷酸化ERK升高。(5)在細(xì)胞內(nèi)，野生種天花粉蛋白能抑制熒光素酶活性，突變種K173A/R174A對(duì)熒光素酶活性抑制作用強(qiáng)于野生種天花粉蛋白，突變種K177A對(duì)熒光素酶活性抑制作用最強(qiáng)。