金魚(yú)人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育單倍體胚胎的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、以往研究表明在金魚(yú)雌核發(fā)育單倍體胚胎發(fā)育過(guò)程中，一些對(duì)發(fā)育起關(guān)鍵作用的基因未能被選擇表達(dá)或表達(dá)受阻，從而導(dǎo)致單倍體發(fā)育畸形。據(jù)羅琛等研究發(fā)現(xiàn)單倍體胚胎發(fā)育不正常是因?yàn)閱伪扼w不能選擇二倍體依賴的調(diào)控系統(tǒng)。其中Vsxl基因在單倍體正常眼胚胎中能夠表達(dá)，而在無(wú)腔眼中不能表達(dá)。與二倍體相比，Vsxl基因在單倍體胚胎中未能被選擇表達(dá)，可能與單倍體胚胎發(fā)育異常有關(guān)。 為了揭示金魚(yú)雌核發(fā)育單倍體胚胎發(fā)育過(guò)程中的這種發(fā)育異常的機(jī)制，本文以遺傳背

2、景一致的金魚(yú)雌核發(fā)育單倍體形成的正常眼和無(wú)腔眼發(fā)育階段的胚胎為材料，通過(guò)蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異進(jìn)行分析，試圖探討影響雌核發(fā)育單倍體金魚(yú)眼睛發(fā)育的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理。首先提取胚胎的全蛋白質(zhì)，采用雙向凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)點(diǎn)的分離，獲得了重復(fù)性較好的凝膠圖譜，采用PDQUEST 2-D分析軟件對(duì)兩者之間的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行比較分析，經(jīng)MALDI-TOF/TOF和ESI-QITOF分析，通過(guò)MaSCOt軟件搜索初步鑒定了27個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。 由于

3、金魚(yú)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)的缺乏，給其蛋白質(zhì)鑒定帶來(lái)了一定的困難。基于同源性搜索的blast方法(MS BLAST)，是近年新發(fā)展起來(lái)的一種用于未知基因組的蛋白質(zhì)鑒定的搜索工具，已成功應(yīng)用于許多未知基因組物種的蛋白質(zhì)鑒定。本文采用MS BLAST方法對(duì)經(jīng)Mascot軟件搜索未能鑒定到的差異蛋白重新鑒定，又有16個(gè)差異蛋白質(zhì)得到了初步鑒定，其中9個(gè)是直接測(cè)序后進(jìn)行MS BLAST搜索得到的結(jié)果，另外7個(gè)是聯(lián)合MS BLAST和SPITC衍生方法得到