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文檔簡介
1、牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我國沿海岸分布的重要經(jīng)濟(jì)魚類,在日本、韓國沿海也有分布。牙鲆個體碩大、肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)價值很高,同時具有一定的藥用價值,因而擁有廣闊的市場。但由于過度捕撈和環(huán)境污染,造成自然資源大幅度衰減,供需矛盾較大,促使牙鲆人工養(yǎng)殖得到迅速的發(fā)展。由于牙鲆雌、雄性的生長差異,牙鲆的全雌化養(yǎng)殖成為研究的熱點。
雌核發(fā)育,根據(jù)處理原理的不同,可分為減數(shù)分裂雌核發(fā)育和有絲分裂雌核發(fā)育。魚類
2、的有絲分裂雌核發(fā)育能夠產(chǎn)生純合后代,即雌核發(fā)育雙單倍體(Doubled Haploid,DH)。利用完全純合的DH再次誘導(dǎo)雌核發(fā)育,可以獲得克隆魚。DH及其克隆系的純合特性,決定了其在遺傳和基因組研究以及魚類育種方面,具有巨大的研究和應(yīng)用價值。但由于DH的孵化率很低,成活率也不高,研究材料及其珍貴,故其性腺組織學(xué)研究還未見報道。本文利用微衛(wèi)星標(biāo)記方法對DH牙鲆進(jìn)行了純合性鑒定,并對其性腺進(jìn)行了組織學(xué)觀察,對其性比及性腺組織學(xué)特征進(jìn)行了描
3、述與分析,以期深入了解DH魚類的生物學(xué)特征。
通過紫外線照射真鯛(Pagrosomus major)精液,利用滅活的精子激活牙鲆的卵子,誘導(dǎo)牙鲆有絲分裂雌核發(fā)育。激活后的卵子靜置3 min后加入17℃海水培育60 min,然后轉(zhuǎn)移至靜水壓力機(jī)中,施加壓力650 kg/cm2,持續(xù)6 min,完成雌核發(fā)育誘導(dǎo)后,移至常溫海水中孵化,之后在水泥池內(nèi)培育2年,獲得試驗樣本129尾。
根據(jù)Genebank上公布的以及
4、EST-SSR方法尋找微衛(wèi)星標(biāo)記,根據(jù)微衛(wèi)星標(biāo)記設(shè)計引物,之后利用牙鲆親本基因組DNA對微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行多態(tài)性篩選,篩選出的20個標(biāo)記用于試驗群體的純合性鑒定:結(jié)果發(fā)現(xiàn),這一群體的20個位點都是純合的,純合度很高,標(biāo)記的分型結(jié)果可以用于基因連鎖圖譜的構(gòu)建。
組織學(xué)切片結(jié)果顯示,在129尾樣本中,雌性88尾,占試驗群體總數(shù)的68%;雄性37尾,占試驗群體總數(shù)的29%;無法區(qū)分雌雄的4尾,占試驗群體總數(shù)的3%,雌雄比例約為1∶0
5、.42;對照組普通牙鲆的雌雄性比為55∶45,接近1∶1。
DH的卵巢發(fā)育階段基本一致,處于Ⅱ期。少數(shù)DH的卵巢發(fā)育正常,多數(shù)卵巢的卵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,在胞核和胞質(zhì)中都有體現(xiàn),呈畸形發(fā)育,根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)可分為7種類型。對照組卵巢發(fā)育至Ⅲ期,與對照組相比,DH的卵巢發(fā)育較遲緩。根據(jù)正常發(fā)育卵母細(xì)胞所占比例,定義正常卵母細(xì)胞比例在50%以上的卵巢為發(fā)育正常卵巢,少于50%的為發(fā)育異常卵巢。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有82尾DH牙鲆的卵巢發(fā)育不正
6、常,說明DH家系的雌性不育或者繁殖力低下。
DH的精巢發(fā)育多停滯在Ⅱ期,精原細(xì)胞成簇分布于精小囊內(nèi),精小囊無腔隙,小葉間有結(jié)締組織,精原細(xì)胞在小葉間成群排列,未有進(jìn)一步的分化,說明雄性是不育的。少數(shù)精巢發(fā)育正常并具有精子,但與對照組精巢結(jié)構(gòu):精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞以及精子等相比,結(jié)構(gòu)上有差異,精原細(xì)胞部分愈合,其它精細(xì)胞也較少。
在DH的卵巢中觀察到卵黃核的解聚過程,可能與脂肪的形成有
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