銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)在生物膜感染中對調(diào)節(jié)性T細胞的影響.pdf

1、目的：探討銅綠假單胞菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)在生物膜感染中對宿主的調(diào)節(jié)性T細胞的影響。
　　方法：選取銅綠假單胞菌的三個菌株即野生株P(guān)AO1和兩個QS系統(tǒng)的基因缺陷株△la sI△rh lI，△la sR△rh lR采用體外靜態(tài)模型培養(yǎng)3天獲得成熟生物膜，收集生物膜上清液（BCM）。三個細菌菌株的BCM分別與人外周血單個核細胞（PBMCs）共通過培養(yǎng)16 h，用CCK-8法檢測BC M的細胞毒性。細胞懸液離心，其中的細胞提取總R NA，定

2、量PCR檢測Foxp3的mRNA水平，而上清液用ELISA法檢測TGF-β1，IL-10以及IL-6的蛋白水平。另外，采用流式細胞術(shù)檢測調(diào)節(jié)性T細胞。建立大鼠生物膜感染模型，檢測Tregs相關(guān)因子Foxp3和TGF-β1，動物實驗驗證QS系統(tǒng)和調(diào)節(jié)性T細胞相關(guān)性。
　　結(jié)果：PBMCs經(jīng)BCM處理后，PAO1-BCM，△lasR△rhlR-BCM及△lasI△rhlI-BCM三個處理組均表現(xiàn)出明顯的細胞毒性。PAO1-BCM處理組

3、 Foxp3 mRNA表達量（1.15±0.16）較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM處理組（0.97±0.11&0.93±0.12）明顯升高（P＜0.05），但是兩個 QS系統(tǒng)缺陷菌株 BCM處理組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。而且PAO1-BCM組 TGF-β1的蛋白表達水平（844.49±40.97 pg/ml）較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM組的表達水平（725.69±129.16 pg/

4、ml&740.29±35.86 pg/ml）明顯升高（P＜0.05），類似的兩QS系統(tǒng)缺陷菌株的BCM處理組之間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。但是值得注意的是，PAO1-BCM組IL-10的表達水平（2.46±1.22 pg/ml）較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM組的表達水平（33.29±6.11 pg/ml&35.11±7.72 pg/ml）卻明顯減低（P＜0.05）。而△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhl

5、R-BCM兩個處理組（799.27±75.66 pg/ml，1305.42±198.48 pg/ml）的IL-6的蛋白表達量較PAO1-BCM處理組（12.63±8.31 pg/ml）明顯升高。動物實驗中發(fā)現(xiàn)Foxp3，TGF-β1的變化與體外實驗的結(jié)果一致。
　　結(jié)論：銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)lasI/rhlI基因和lasR/rhlR基因在銅綠假單胞菌生物膜感染中可促進宿主的調(diào)節(jié)性T細胞的活化，這可能是最終導(dǎo)致臨床上生物膜感染持續(xù)性